Все о лечении и профилактике туляремии. Вакцинация надкожным способом. Показания и противопоказания

Что такое туляремия, и насколько опасно это заболевание? Если у кого-нибудь, кто не имеет медицинского образования, поинтересоваться о том, что такое туляремия, ответ будет отрицательным. Так как об этой болезни знают не многие. Даже медработники не всегда слыхали об этом недуге. А о родителях говорить и вовсе не приходится.

Что такое туляремия?

Туляремия – малоизвестное заболевание, о котором знают, как правило, только в тех регионах, где часто фиксируются вспышки эпидемии. Это зоонозное инфекционное заболевание, которое протекает в острой форме и способно передаваться от человека к человеку, от животного к человеку. Причем промежуточным звеном в этой цепочке переносчиков выступает насекомое (клещи, комары, москиты, слепни). Болезнь не распространена повсеместно, она локализуется только в определенных зонах и районах страны. При этом насекомые-переносчики способны заразить не только человека, но и домашнее животное, с которым так любят проводить время взрослые, а главное – дети. Именно по этой причине, прививка от туляремии в детском возрасте крайне важна и необходима.

Вакцина от туляремии

Болезнь, за последние несколько лет, стала набирать обороты, особенно среди детей, поэтому и прививка от туляремии была внесена в график обязательных. Проводить ее необходимо не всем подряд, а только тем, кто находиться в группе риска.

По статистическим данным, за последние десятилетия, количество заболеваний на туляремию сильно возросло – от 60 до 500 случаев в год.

Инфекция во всех случаях лечится, но терапия проводится с использованием антибиотиков, курс лечения которыми затягивается на месяцы.

Главным симптомом, который может беспокоить человека – увеличенные лимфоузлы, их еще называют «бубоны». Процесс заживления после начала терапии – четыре месяца.

Также зафиксированы и смертельные случаи, когда возбудитель туляремии, при попадании в кровь, провоцирует развитие пневмонии, воспаления головного мозга, психоза и воспаления суставов.

Исходя из всего вышесказанного, было принято решение о вакцинации детей и взрослых, в тех районах и областях России, где болезнь широко распространена, и среди тех, кто находиться в непосредственном контакте с больными пациентами.

Прививка против туляремии показана не всем, но ее рекомендуют делать малышам и взрослым, которые могут столкнуться с недугом. Дело в том, что болезнь, даже несмотря на то, что ее можно вылечить, иногда переходит в хроническую скрытую форму, и периодически проявляется при резко сниженном иммунитете. К тому же, существует целый ряд осложнений, бороться с которыми иногда бывает гораздо сложнее, чем с самой болезни. Не стоит забывать и о главных симптомах, которые долго залечиваются и имеют неприятный вид – о бубонах (увеличенных лимфатических узлах). Терапия при этом длительная и не всегда эффективная.

Именно поэтому вакцина против туляремии крайне важна.

Показания к иммунизации

Инструкция по применению показывает вводить прививку в качестве плановой и экстренной профилактики недуга в очагах инфицирования. Вакцину вводят только определенному кругу людей, которые могут столкнуться с переносчиками инфекции в природе или по роду своих занятий.

Интересно! За последние годы вспышки инфекции были зафиксированы в Центральном, Северном и Западносибирском регионах страны. Именно здесь эпидемическая обстановка находиться под постоянным контролем. Также здесь делаются регулярные прогнозы на последующие годы. В этих регионах делать прививку от туляремии показано всем.

Правила проведения вакцинации

Прививание делают как экстренно, для профилактики недуга, так и планово тем, кто находится в группе риска и проживает на территории зараженной зоны.

Схема проведения вакцины очень проста – прививку делают единоразово. После вакцинации проводят контроль выработки иммунитета против инфекции. Как правило, контрольный забор крови для анализа берут на пятый или седьмой день после прививания, а также по окончанию двух недельного периода. В том случае, когда результат показывает полное отсутствие антител к инфекции, вакцинирование проводят повторно.

Куда ставится укол?

Прививка делается внутрь кожи или накожно, в переднюю поверхность средней трети плеча.

Техника проведения прививания, как правило, отличается. Так как могут быть выбраны разные способы введения вакцины.

Первый способ заключается в том, что инъекцию вводят накожно. То есть, кожный покров на плече вначале обрабатывают спиртом и после высыхания, с помощью пипетки наноситься по одной капле раствор в двух местах, предварительно разведенный. Расстояние между каплями – три или четыре миллиметра. После этого на месте где был нанесен препарат, делают два тонких параллельных разреза или насечки.
Второй способ заключается в том, что препарат вводят внутрикожно. При этом вещество разводят и шприцом в дозировке 0,1 мл вводят в наружную поверхность средней трети плеча.

Прививку против туляремии детям показано проводить с семи лет. В очагах полевого типа – с четырнадцати лет.

Противопоказания

Противопоказания к проведению прививки следующие:

период беременности и кормления грудью;
перенесенные инфекции в анамнезе;
аллергия на компоненты препарата;
детский возраст до семи лет;
болезни, характеризующиеся сниженной иммунной системой (при туберкулезе, онкологических патологиях, при ВИЧ, СПИД);
острые инфекционные заболевания.

Какая наблюдается реакция на прививку?

Обычно, туляремийную вакцину привитые пациенты переносят хорошо, без фиксирования каких-либо побочных эффектов. Но в некоторых случаях может возникнуть:

Легкая отечность или покраснение на месте введения укола (проявляется у всех привитых на 5 день).
В отдельных случаях может наблюдаться увеличение лимфатических узлов в области подмышек, шеи.
При внутрикожном введении инъекции возможно появление головной боли, слабости или недомогания, также возможно временное повышение температуры тела.
Одним из возможных побочных эффектов можно выделить появление аллергической реакции.

Чего нельзя делать после вакцинации?

Вакцина от туляремии

Существует один препарат, который вводят с целью прививания против туляремии. Это «Вакцина туляремийная живая сухая», сокращенно ТВМ. Препарат выпускают в ампульной форме, в сухом виде. Перед началом проведения прививки вакцину разводят с водой для инъекций, тщательно встряхивая в течение трех минут до полного растворения порошка. В результате, из одной ампулы получается несколько доз.

Важно! Перед началом введения вакцины специалисты всегда обязаны проверить наличие/отсутствие иммунитета к болезни.

Если вакцина была введена правильно, у ребенка или у взрослого вырабатывается иммунитет на пять лет.

Нужна ли вам и вашему малышу прививка от туляремии или нет – решать только вам. Каждый родитель должен понимать и оценивать все возможные риски, как от прививки, так и об самого заболевания и осложнений, которые могут возникнуть в итоге. Поэтому, если вы в группе риска – проконсультируйтесь с доктором и примите правильное решение! Будьте здоровы!

Видео

Посмотрите ролик с Еленой Малышевой об опасности туляремии и прививке от нее:

Является заболеванием местной, очаговой локализации. Болезнь присуща представителям животного мира, которые и являются ее основными переносчиками. К сожалению, люди – категория с высоким риском заражения при контакте с животным.

Возбудитель заболевания – микроорганизм бактериального происхождения. Средой его обитания могут быть как сами животные, так и почва, в которой они свободно могут прожить около полугода. Попадая в организм животного, бактерия инфицирует организм, развивается заболевание. В дикой природе зверь гибнет от туляремии, а в его теле бактерия продолжает жить еще несколько месяцев.

Человек, заражаясь от животного туляремией, становится не разносчиком, а носителем. Он не может заразить окружающих, в отличие от братьев наших меньших.

Заболевание довольно опасное. Основными проявлениями считаются:

повышенная температура тела до 40 градусов;
слабость, усталость и вялость преследуют пациента;
некоторые проявления похожи на отравление – понос, рвота, потеря аппетита;
воспаление лимфосистемы – отечность и увеличение узлов;
спустя время место инфицирования, укуса начинает нарывать;
когда очаг созрел, из него выходит густой гной.

Это далеко не все признаки, ведь туляремия довольно смешана в симптомах, когда добавляется новая болезнь на фоне туляремии. Случается что человек заражается легочной туляремией. Она по симптоматике очень схожа с пневмонией, но не совсем. Отделение мокроты с гноем сигнализирует о туляремии.

Кто находится в зоне риска заражения

Специфические профессии, такие как агрономы, работники сельскохозяйственной сферы, люди, проживающие в сельской местности. Например, контакт с зараженной почвой, водой, а также контакт с грызунами, обработка туш животных, укуса клеща и т. д. – самые распространенные случаи заражения.

Туляремия – заболевание довольно опасное для жизни человека. Потому есть способ обезопасить себя от заражения ее возбудителем. Прививка – один из лучших способов предупредить болезнь.

Вакцина против туляремии: для кого

Обычно прививка против заболевания ставится населению в зоне частого инфицирования данной болезнью. Колоть вакцину против туляремии можно детям с 7-летнего возраста. После первого укола следующая прививка организма от туляремии возможна только через 5 лет.

Прививка содержит в себе штаммы ослабленной бактерии туляремии. При попадании слабой инфекции кровь, иммунитет начинает выстраивать природный защитный барьер. Он сохраняется на протяжении последующих лет.

Введение прививки

Перед процедурой вакцинации в обязательном порядке проводят пробу пациенту, чтобы определить по реакции организма наличие отрицательного иммунитета к заболеванию. После подтверждения можно вводить вакцину против туляремии. Введение делают подкожно, внутрикожно.

Побочные эффекты после прививки

Иногда встречаются различные пациентов. Это нормальная и здоровая реакция организма. Потому при появлении следующих симптомов не стоит беспокоиться:

общее плохое самочувствие, головная боль, повышение температуры тела;
аллергические проявления на коже, отек, покраснение на месте введения вакцины против туляремии;
можно заметить опухание, увеличение лимфатических узлов.

Подобные побочные эффекты должны проходить довольно быстро. Если же у вас на протяжении нескольких дней наблюдаются разного рода симптомы с обострением, то обратитесь к врачу для детального изучения вашей клинической ситуации.

Противопоказания прививания против туляремии

При некоторых состояниях организма лучше отменить или отложить прививание против заболевания:

проблемы с иммунной системой;
временное нездоровье – ОРЗ, грипп и прочие;
наличие иммунитета к туляремии;
заболевания крови;

опухолевидные новообразования в тканях;
болезни соединительного волокна;
дерматологические проблемы, разного рода аллергии;
индивидуальные ситуации и прочее.

Беременным женщинам, кормящим грудью не делают вакцинацию против туляремии. Позаботьтесь о своем здоровье до беременности.

Профилактика

Личная гигиена, работа в перчатках при контактах с возможными источниками инфекции – лучшая профилактика заражения, которая в ваших силах. Усиленная иммунная защита – вакцинация. Но нужна ли прививка, решать вам.

Прививочные препараты. Для иммунопрофилактики туляремии применяется вакцина туляремийная живая сухая.

Вакцина туляремийная живая сухая представляет собой лиофилизированную сухую культуру туляремийного вакцинного штамма 15 линии НИИЭГ, имеет вид однородной пористой таблетки белого или слегка желтоватого цвета. К вакцине приложен растворитель - дистиллированная вода. Препарат следует хранить в темном сухом месте, при температуре не выше 8°С. Срок годности - 2 года.

Перед применением вакцину проверяют на пригодность и разводят растворителем. Разведенная вакцина должна быть использована в течение 2 часов. Неиспользованную вакцину уничтожают кипячением.

Показания к вакцинации. Вакцинацию проводят для профилактики туляремии в плановом порядке и по эпидемическим показаниям согласно
инструктивным указаниям и планам Министерства здравоохранения.

Схема иммунизации. Прививки проводят лицам с отрицательными серологическими и аллергическими реакциями. Перед каждой прививкой у вакцинируемого определяют наличие специфического иммунитета с помощью одной из серологических или кожно-аллергической реакций.

Используют два способа введения вакцины: накожный (плановая вакцинация) и внутрикожный с помощью безыгольного инъектора (по
эпидемическим показаниям). Только накожный метод применяется для вакцинации против туляремии детей от 7 лет и старше по эпидемическим
показаниям, по решению министерства здравоохранения. Доза вакцины и техника вакцинации та же, что и для взрослых. Одна накожная прививочная доза вакцины (две капли) должна содержать 2´10 8 , одна внутрикожная доза – 1´10 7 живых микробов.

Вакцинация проводится однократно. При наличии показаний при отрицательных серологических или аллергических пробах через 5лет осуществляют ревакцинацию. Доза для ревакцинации та же, что и при первичном применении.

Допускается одновременная накожная вакцинация взрослых
против туляремии, бруцеллеза и чумы на разных участках наружной поверхности трети плеча.

При введении вакцины накожным способом в ампулу с сухой вакциной вносят растворитель (дистиллированная вода), находящийся в ампулах в комплекте с препаратом. Ампулу встряхивают в течение 3 минут до образования гомогенной взвеси.

Место введения вакцины против туляремии - наружная поверхность средней трети плеча. Кожу перед прививкой обрабатывают спиртом или
смесью спирта с эфиром, применение других дезинфицирующих средств не допускается.

Ожидают испарения спирта и эфира, после чего на обработанный участок кожи стерильной глазной пипеткой наносят по одной капле
разведенной вакцины в двух местах на расстоянии 30-40 мм друг от друга. Кожу плеча слегка натягивают и стерильным скарификатором (оспопрививательным пером) делают через каждую нанесенную каплю вакцины по 2 параллельные насечки длиной 10 мм. Насечки не должны кровоточить, кровь должна выступать только в виде мелких росинок. Плоской стороной оспопрививательного пера втирают вакцину в насечки в течение 30 сек и дают подсохнуть 5-10 мин.

При вакцинации внутрикожным способом с применением безыгольного инъектора вакцину разводят в дистиллированной воде (объем указан на этикетке), как для накожного применения. После этого набирают в стерильный шприц в объеме 1 мл и переносят в стерильный флакон для инъектора, куда добавляют 10 мл стерильного апирогенного изотонического раствора натрия хлорида (0,9 %), 20 мл полученной взвеси содержат 200 доз вакцины для внутрикожного введения. Место инъекции вакцины предварительно обрабатывают спиртом или смесью спирта с эфиром. Вакцину вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл в наружную поверхность средней трети плеча согласно Инструкции по применению инъектора при режиме, рассчитанном на внутрикожное введение.

Реакция на введение вакцины туляремийной живой сухой. У всех привитых накожным способом должна развиваться местная реакция, которая проявляется тем, что на месте насечек с 4-5-го дня (у некоторых вакцинированных в более поздние сроки - до 10-го дня) наблюдается гиперемия и отек диаметром до 15мм. По ходу насечек могут появиться везикулы величиной с просяное зерно. С 10-15-го дня на месте прививки образуется корочка, местные явления стихают, при отпадении корочки на коже остается рубчик. Иногда может наблюдаться небольшое кратковременное увеличение и болезненность регионарных лимфатических узлов. При отрицательном результате отмечается небольшая краснота вдоль насечек в течение 1-2-х дней.

У лиц, привитых внутрикожным способом, местная реакция проявляется умеренно выраженной гиперемией и инфильтратом кожи диаметром до 40 мм, редко - увеличением регионарных лимфатических узлов, которая через 9 суток исчезает.

Общие реакции на вакцинацию возникают лишь в отдельных случаях с 3-4 дня и проявляются недомоганием, головной болью, реже кратковременным повышением температуры до 38°С. Эти явления исчезают через 2-3 суток. Крайне редко у привитых на третьей-четвертой неделе после вакцинации появляются общая и местная реакции аллергического характера.

Общая и местная реакция на прививку у лиц, переболевших туляремией или ревакцинированных, развиваются более бурно. При этом угасание прививочных реакций происходит быстрее, чем у первично вакцинированных.

Результат вакцинации против туляремии при накожном введении проверяют через 5-7 дней, а в случае отсутствия кожной реакции - повторно на 12-15 день. Оценку результатов внутрикожной вакцинации проводят через 4-5 суток после прививки. Положительной реакцией считают наличие гиперемии и инфильтрата диаметром не менее 5мм. Лицам с отсутствием положительного результата прививки проводят повторную вакцинацию через 30 дней.

Противопоказания. Противопоказаниями для иммунизации вакциной туляремийной живой сухой являются:

1. Болезни системы кровообращения (декомпенсированные врожденные и приобретенные пороки сердца, острый и подострый септический эндокардит, недостаточность кровообращения II-III степени, гипертоническая болезнь II-III степени).

2. Аллергические заболевания (бронхиальная астма, ангионевротический отек, сенная лихорадка).

3. Болезнями крови (гемофилия, злокачественные новообразования лимфатической и кроветворной ткани).

4. Злокачественные новообразования.

5. Иммунодефицитные состояния (врожденные и приобретенные).

6. Туляремия в анамнезе (при положительных пробах на тулярин и серологических реакциях).

Временно противопоказана вакцинация людей с гипертермией выше 37,5°С, беременных женщин, а также лиц, находящихся на лечении по поводу следующих заболеваний: острые инфекционные заболевания, включая период выздоровления, ревматизм, туберкулез, острые нефриты и хронические в стадии обострения, острые гепатиты и хронические в стадии обострения, инфаркт миокарда.

При отдельных вспышках инфекционного заболевания заражаются десятки, сотни, тысячи человек. Болезнь имеет четко выраженный очаговый характер. Для заболевания, как туляремия прививка необязательна, но рекомендована из-за участившихся случаев вспышек.

Туляремия называется мышиной лихорадкой. Название заболевания говорит о его основных распространителях. Ими являются различные виды грызунов: мыши, крысы и кролики с зайцами. Раньше болезнь имела другие названия. Она называлась кроличьей лихорадкой, малой чумой.

Ранее прививка против туляремии делалась в обязательном порядке.

Удалось существенно сократить число заболеваний. Количество регистрируемых случаев болезни составляло 100–400 человек. Вакцинация перестала носить обязательный характер. В результате заболеваемость вновь начала увеличиваться.

В группе риска находятся люди, работающие и живущие в сельской местности. При контакте с кровью зараженных животных, которых жители деревень разводят на мясо (кролики), при контакте с различными грызунами – мышами, крысами, происходит инфицирование.

Человек заболевает при употреблении плохо прожаренного и недостаточно обработанного мяса кролика, зайца, от приема зараженной воды, укуса насекомого. Реже инфицирование происходит от вдыхания пыли с остатками мочи и крови грызунов. Это говорит о необходимости проведения при туляремии прививки.

Болезнь проявляется рядом симптомов:

Рвота.
Высокая температура – 40 градусов.
Выделение гноя из места укуса, если инфицирование произошло от укуса насекомого.
Понос.
Сильная слабость.
Увеличение лимфатических узлов, отечность.

Необходимость прививки

Отвечая, нужно ли делать прививку от туляремии, необходимо учитывать степень риска конкретно взятого человека заболеть указанным заболеванием.

К группе риска относят:

Жителей зараженной местности с зарегистрированной вспышкой инфекции.
Людей, отдыхающих в странах, имеющих вспышку болезни.
Работников лабораторий, контактирующих с различными видами туляремийных бактерий.
Работников, приехавших на работу в зараженную местность в срочном порядке.
Работников, участвующих в обеззараживании зараженной местности.
Всех работников животноводств, ферм с отмеченной вспышкой инфекции.

Указанным категориям лиц обязательно делается прививка. По желанию делается прививка от туляремии детям. Прививают детей с 7-летнего возраста. Вакцина вводится внутрь кожи. Через несколько недель у человека вырабатывается иммунитет к инфекции, сохраняющийся пять лет.

Прививка от туляремии представляет живую вакцину, она сочетается с вакцинами от чумы и бруцеллеза. Необходимо делать несколько прививок в разные части тела.

Противопоказания

Вакцина имеет противопоказания:

тканевые опухоли;
возраст моложе семи лет;
беременность, период кормления ребенка грудью;
перенесенная туляремия;
чувствительность к компонентам вакцины;
низкий иммунитет, вызванный онкологическими заболеваниями, туберкулезом;
наличие в организме острой инфекции;
кожные заболевания;
болезни крови.

Возможные реакции на прививку

У привитого человека иногда отмечается появление ряда симптомов:

головные боли;
болезненные ощущения в области лимфатических узлов, припухлость;
появление аллергических реакций;
появление покраснений, отека в месте прививки;
повышение температуры тела (37 градусов и больше);
слабость, вялое состояние.

Появление подобных симптомов не считается плохим признаком. Это свидетельствует об активном вырабатывании организмом иммунитета против болезни. Указанные побочные эффекты возникают в первые два дня.

Отечность в месте укола возникает уже на второй или четвертый день. После двух дней от действия вакцины у человека повышается температура.

Отсутствие симптомов после пяти дней, как прошла вакцинация, свидетельствует о слабой выработке иммунитета к туляремии. Потребуется сделать повторную прививку.

Особые реакции на прививку

У людей на прививку возникают особые реакции:

высокая температура выше 39 градусов;
сильный отек лимфатических узлов;
анафилактический шок.

Указанные реакции возникают редко, могут проявляться в течение первых суток, как человек был привит вакциной.

Подобные побочные явления связаны с повторной вакцинацией, наличием у человека иммунитета к болезни. Необходимо находиться под контролем врача при риске появления негативных реакций.

Осложнения болезни и отзывы о вакцине

Заболевание опасно тем, что способно перейти в серьезные проявления в виде перитонита, менингоэнцефалита, перикардита, гнойных нарывов, гангрены.

Многочисленные отзывы о вакцине имеют чаще отрицательный характер. Многие ссылаются на негативные побочные реакции от ее введения, особенно в организме детей. Делать или нет прививку? Вопрос конкретной ситуации, требований безопасности.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вакцина туляремийная живая ФС.3.3.1.0019.15

Взамен ГФ Х, ст. 716 ФС 42-3178-95

Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину туляремийную живую, лиофилизат для приготовления суспензии для внутрикожного введения и накожного скарификационного нанесения, представляющую собой живую культуру вакцинного штамма Francisella tularensis 15 НИИЭГ, лиофилизированную в стабилизирующей среде.

Вакцина предназначена для профилактики туляремии и обеспечивает развитие специфического иммунитета продолжительностью до 5 лет.

ПРОИЗВОДСТВО

Вакцинный штамм F . tularensis 15 НИИЭГ должен иметь типичные культуральные, морфологические, биохимические и антигенные свойства; остаточная вирулентность (LD 50) вакцинного штамма для белых мышей массой (19 ± 1) г должна находиться в пределах от 10 2 до 2 10 6 живых микробных клеток (м.к.); штамм не должен вызывать гибель морской свинки при введении дозы, равной 5 10 9 м.к; при накожной иммунизации морских свинок дозами 5 10 6 и 5 10 7 м.к. должен вызывать появление инфильтрата и гиперемии диаметром от 5 до 15 мм; при определении иммуногенности показатель ЕD 50 для морских свинок должен быть не более 1000 микробных клеток.

Перед приготовлением производственной культуры вакцинного штамма F . tularensis 15 НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных иммуногенных (белых) колоний, образующихся на плотной питательной среде при посеве селезенки и регионарных лимфатических узлов.

Технология производства вакцины предусматривает получение посевных культур I, II и III генераций штамма F . tularensis 15 НИИЭГ; процесс накопления биомассы, необходимой для приготовления микробной взвеси определенной концентрации; последующий розлив, замораживание, сублимационное высушивание; герметизацию и упаковку препарата. На стадиях приготовления посевных культур определяют рН, концентрацию микробных клеток, отсутствие посторонней микрофлоры.

В качестве стабилизаторов используются вещества, разрешенные для производства иммунобиологических лекарственных препаратов: сахароза, натрия глутамат, тиомочевина, желатин.

ИСПЫТАНИЯ

Описание

Пористая масса белого c желтоватым оттенком цвета.

Восстановленный препарат – гомогенная мутная суспензия белого с желтоватым оттенком цвета без посторонних примесей, осадка или хлопьев. Определение проводят визуально.

Подлинность

Должна содержать чистую культуру вакцинного штамма F . tularensis 15 НИИЭГ. Определение проводят иммунофлуоресцентным методом с использованием иммуноглобулинов туляремийных диагностических флуоресцирующих в соответствии с инструкцией по применению. В мазках из препарата должно наблюдаться специфическое ярко-зеленое свечение по периферии микробных клеток.

Время растворения

Должна полностью растворяться в течение 3 мин при добавлении 1 мл воды для инъекций при встряхивании.

Время седиментационной устойчивости

Суспензия не должна расслаиваться в течение 5 мин. Определение проводят в соответствии с .

Размер частиц

Суспензия должна свободно проходить в шприц через иглу № 0840. Определение проводят в соответствии с .

рН

От 6,8 до 7,2. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с . Для испытания используют 20 ампул, содержимое каждой ампулы растворяют в 1 мл воды для инъекций.

Потеря в массе при высушивании

Не более 4,0 %. Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с . Для испытания используют 6 образцов.

Средняя масса и отклонение от средней массы

Коэффициент вариации массы вакцины в ампулах должен быть не более 5 %. Определение проводят в соответствии с .

Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов

Вакцина не должна содержать посторонних микроорганизмов и грибов. Препарат должен представлять чистую живую культуру вакцинного штамма туляремийного микроба. Определение проводят в соответствии с с использованием тиогликолевой среды.

За один образец принимают содержимое двух ампул препарата. В ампулы вносят по 1 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, перемешивают и по 1 мл каждого образца высевают в 2 пробирки, содержащие по 20 мл тиогликолевой среды. Одну пробирку из каждого образца инкубируют при температуре от 30 до 35 о С для выявления аэробных и анаэробных микроорганизмов, другую – при температуре от 20 до 25 о С для выявления грибов. Через 5 – 7 сут из каждой пробирки производят пересев по 0,5 мл в 2 пробирки, содержащие по 10 мл тиогликолевой среды, и инкубируют при указанных выше температурах. Через 14 сут выращивания со дня первичного посева из всех пробирок делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют при увеличении 90×10.

В случае обнаружения хотя бы в одном из 10 просмотренных полей зрения грамположительных кокков или палочек препарат считается загрязненным посторонней микрофлорой.

При выявлении в мазках грамотрицательных палочек, отличающихся по морфологии от туляремийных бактерий, из этого образца готовят 3 мазка, которые обрабатывают иммуноглобулинами туляремийными диагностическими флуоресцирующими, и просматривают в каждом мазке не менее 10 полей с помощью люминесцентного микроскопа. Если не все бактерии, обнаруживаемые в препарате, специфически окрашиваются ярко-зеленым свечением по периферии микробных клеток — препарат считают не выдержавшим испытание.

Специфическая безопасность

Вакцина должна быть безопасной и не вызывать гибель более одной морской свинки из 3.

Вакцина, введенная 3 морским свинкам массой (475 ± 25) г в объеме 1 мл подкожно в дозе 5 10 9 м.к., полученной в соответствии со стандартным образцом (СО) мутности (10 МЕ), эквивалентным 5 10 9 м.к./мл туляремийных бактерий, не должна вызывать гибель животных в течение 15 сут наблюдения. В месте введения возможен некроз тканей кожи и подкожной клетчатки.

В случае, если животные остаются живыми или наступает гибель одной морской свинки, препарат считают безопасным. В случае гибели 2 и более животных испытание повторяют на их удвоенном количестве. Если при повторном контроле наблюдается гибель аналогичного количества животных, препарат считают не выдержавшим испытание.

Специфическая активность

Концентрация микробных клеток. В препарате должно содержаться (2 ± 1) 10 10 м.к. в 1 мл. Колебания результатов определений в отдельных ампулах серии не должны превышать 5 % от средней арифметической величины.

Определение проводят в трех образцах (один образец – содержимое двух ампул). В две ампулы с вакциной вносят по 1 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, рН (7 – 7,2), и после получения гомогенной суспензии объединяют содержимое ампул. Из каждого образца 0,5 мл суспензии используют для определения концентрации микробных клеток в 1 мл вакцины. Для этого по 0,5 мл каждого образца вакцины вносят в отдельные стандартные пробирки и добавляют 0,9 % раствор натрия хлорида до соответствия СО мутности (10 МЕ).

Концентрацию микробных клеток (ОK) определяют по формуле:

V — объём 0,9 % раствора натрия хлорида, взятого на разведение пробы, мл;

0,5 — объём испытуемого образца, мл;

5 10 9 – эквивалент туляремийного микроба, соответствующий СО мутности (10 МЕ), м.к./мл.

Количество живых микробных клеток. Количество живых микробных клеток должно составлять не менее 40 % от общего количества микробных клеток. Колебания результатов определений в образцах серии не должны превышать 20 % от средней арифметической величины.

При определении содержания живых микробных клеток в вакцине используют концевые химически чистые пипетки и пробирки с 0,9 % раствором натрия хлорида, охлажденные до температуры от 2 до 8 о С.

Для определения количества живых микробных клеток из приготовленных ранее образцов взвесей вакцины делают последовательные десятикратные разведения от 10 -1 (к 0,5 мл вакцины добавляют 4,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида) до 10 -7 , используя для каждого разведения отдельную пипетку вместимостью 1 мл. Из последнего разведения по 0,1 мл взвеси отдельно для каждого образца высевают на 3 чашки Петри с отконтролированными рыбно-дрожжевым питательным агаром с добавлением цистеина и глюкозы или с питательной средой для выделения и культивирования туляремийного микроба (FT-агар).

Учет результатов определения количества живых клеток в вакцине проводят через 5 сут выдерживания посевов при температуре (37 ± 1) о С.

За количество живых микробных клеток принимают среднюю арифметическую определений количества выросших колоний в 3 образцах. Полученную величину умножают на степень разведения культуры (10 -7) и увеличивают в 10 раз (для контроля используют 0,1 мл вакцины), получая количество живых туляремийных микробов, содержащихся в 1 мл вакцины.

БК – количество живых м.к. в 1 мл;

ОК – общая концентрация, м.к.

Степень диссоциации. Число SR иммуногенных «белых» колоний должно составлять не менее 80 % от общего количества выросших колоний.

Количество колоний определяют на тех же чашках Петри с посевами, на которых определяют содержание живых микробных клеток. После инкубации чашек Петри в термостате при температуре (37 ± 1) о С в течение 5 сут их помещают на 24 ч в холодильник при температуре от 2 до 8 о С. После этого подсчитывают число иммуногенных «белых» и неиммуногенных «серых» колоний и вычисляют их процентное соотношение.

Количество накожных доз. В ампуле должно содержаться от 15 до 50 накожных доз. Количество прививочных доз в ампуле устанавливается путем деления количества живых м.к. на 2 10 8 м.к., составляющих одну прививочную дозу.
Прививаемость. При накожной иммунизации морских свинок дозой 2 10 7 живых м.к. в объеме 0,1 мл у всех животных через 2 – 5 сут вокруг насечек должны образоваться инфильтрат и гиперемия диаметром от 5 до 15 мм.

В ампулу вносят воду для инъекций из расчета 0,1 мл на 1 накожную дозу. Полученную микробную взвесь разводят 0,9 % раствором натрия хлорида в 10 раз до концентрации 2 10 8 живых м.к. в 1 мл и прививают 3 морских свинок массой (400 ± 25) г накожно методом скарификации в объеме 0,1 мл. На участок депилированной кожи, предварительно обработанной спиртом и эфиром (1:1), после испарения эфира наносят пипеткой 2 капли микробной взвеси на расстоянии 20 – 30 мм друг от друга. Через каждую каплю оспопрививательным пером делают по 2 параллельные некровоточащие насечки длиной 8 – 12 мм. Нанесенную на кожу взвесь тщательно втирают в течение 1 мин плоской стороной пера.

Если препарат не выдерживает испытание, контроль повторяют по той же методике на удвоенном количестве животных.

Иммуногенность. Не менее 8 из 10 морских свинок, привитых накожно дозой 2 10 7 живых м.к. в объеме 0,1 мл, должны быть предохранены от гибели при подкожном заражении 1000 Dcl (Dosis certa letalis) вирулентного штамма туляремийных бактерий голарктической расы, 1 Dcl которого не должна превышать 5 м.к.

Иммунизируют 10 морских свинок массой (350 ± 50) г дозой 2 10 7 м.к. в объеме 0,1 мл накожно скарификационным методом, как при определении прививаемости.

Через 25 – 30 сут после иммунизации проводят заражение иммунизированных животных дозой 1000 Dcl, а 3 неиммунизированных (контрольных) животных заражают 1 Dcl вирулентного штамма F . tularensis . Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 30 сут.

Все контрольные животные должны погибнуть от туляремии в срок до 15 сут. У них должны наблюдаться типичные патологоанатомические изменения (плотный инфильтрат на месте введения, гиперемия сосудов подкожной клетчатки и паховых лимфатических узлов, увеличение и уплотнение селезенки и печени). Всех павших животных вскрывают, органы и ткани высевают методом отпечатков на чашки Петри с рыбно-дрожжевым агаром с добавлением цистеина и глюкозы или FT-агаром с добавлением 5 % крови.

В случае гибели более 2 свинок из 10 иммунизированных и всех зараженных животных испытание повторяют по той же методике в сравнении со стандартным образцом вакцины туляремийной живой.

Если при повторном контроле погибли более 2 свинок из 10 иммунизированных и зараженных, а для стандартного образца эти показатели остались в пределах нормы – данную серию считают не выдержавшей испытание.

Термостабильность

Не менее 7 сут. Показатель термостабильности (срок, в течение которого в препарате сохраняется 50 % живых микробных клеток по отношению к первоначальному количеству) определяют в 3 образцах после хранения вакцины при температуре (37 ± 1) о С в течение 14 сут.

Методика определения количества живых микробных клеток изложена в разделе «Специфическая активность».

Показатель термостабильности (t ) в сут рассчитывают по формуле:

lg A 0 – логарифм первоначального количества живых м.к./мл;

lg A n – логарифм количества живых м.к./мл через 14 сут хранения вакцины при температуре (37 ± 1) о С;

0,3 – постоянная величина;

14 – срок хранения вакцины при температуре (37 ± 1) о С, сут.

Растворители, выпускаемые в комплекте с вакциной

Вода для инъекций в ампулах по 5 мл.