차별 영양 배지. 건조한 환경. 프로파지는

1.1. 엔도미디어,레비나, 플로스키레바. 장내 세균 배양을 위한 감별 진단 선택 배지로 사용됩니다(유당 함유). 이러한 배지에서 발견된 유당(유당)을 발효시키는 미생물은 유색 집락, 즉 유당 양성(금속 광택이 있거나 광택이 없는 빨간색 집락)을 형성합니다. 유당을 발효시키지 않는 미생물 군집, 무색 - 유당 음성 - 옅은 분홍색, 투명하고 빛을 투과합니다.

70°C의 MPA(pH 7.6) 100ml에 20% 유당 용액 5ml와 염기성 푹신 포화용액 0.5ml와 새로 제조한 황산나트륨 용액 1.25ml의 혼합물을 무균적으로 첨가합니다. .

1.2. 전분을 함유한 미디어아밀라아제를 생산하는 미생물을 식별하는 데 사용됩니다. 배양액에 Lugol 용액 몇 방울을 첨가하여 효소의 존재 여부를 확인합니다.

(매체의 색상은 변하지 않습니다). 소화되지 않은 전분은 이 용액에서 파란색을 나타냅니다.

1.3. 우유.유당을 발효시키는 미생물의 성장으로 응고됩니다.

2. 상업용 키트 - 생화학적 특성 연구용(당분해 및 단백질 분해 활성에 의한 미생물 동정)

2.1. 탄수화물이 포함된 히스 미디어(포도당, 유당, 자당, 아라비노스 등 ) 미생물의 효소 활성이 검출되는 곳 탄수화물 분해 중에 형성된 산의 영향으로 지시약은 배지의 색상을 변경합니다. 밀짚빛 노란색 매체는 긍정적인 반응에 따라 빨간색이나 강렬한 분홍색으로 색상이 변하므로 이러한 매체를 '다양한 시리즈'라고 부릅니다. 이 탄수화물을 발효시키지 않는 미생물은 색깔이 변하지 않고 배지에서 자랍니다. 가스의 존재는 한천이 포함된 배지에 기포가 형성되거나 액체 배지의 "부유물"에 축적되어 결정됩니다.

성분 : 펩톤 - 10g, 염화나트륨 - 5g, 탄수화물 - 10g, Andrede 시약 (fuchsin) - 10ml, 증류수 ~ 1000ml, 멸균 후 pH 7.2-7.4.

2.2. 단백질 분해 특성 연구용 배지

젤라틴이 포함된 미디어. 일부 세균(비브리오 콜레라, 포도상구균, 탄저균 등)에서는 젤라틴을 액화시켜 단백질 분해효소를 검출합니다.

수요일은 우유와 함께.분해되는 미생물 카세인(우유 단백질),우유의 펩톤화를 유발합니다. 유청처럼 보입니다.

펩톤이 포함된 미디어.펩톤이 분해되면 인돌, 황화수소 및 암모니아가 방출될 수 있습니다. 그들의 형성은 표시 용지를 사용하여 결정됩니다. 여과지에는 특정 용액이 미리 함침되어 건조되고 스트립으로 자르고 MPB에 배양 물을 뿌린 후 MPB와 시험관 벽 사이의 마개 아래에 놓습니다. 온도 조절기에서 배양한 후 결과를 고려합니다. 암모니아는 리트머스 종이를 파란색으로 변하게 합니다. 아세트산납과 중탄산나트륨을 함유한 용액에 담근 종이에 황화수소가 방출되면 황산납이 형성되고 종이가 검게 변합니다. 인돌은 뜨거운 옥살산 포화 용액에 담근 종이 조각을 붉게 만듭니다.

2.3. 마이크로테스트 - 시스템(MTS).이는 멸균 감별 진단 매체가 들어 있는 웰이 있는 폴리스티렌 플레이트입니다.

2.4. 종이 표시 시스템(SIB) -여과지에 감별 진단 매체.

혐기성 미생물 배양 및 분화용 : Wilson-Blair 배지. 포도당, Na 2 SO 3 및 염화철 FeCl 2가 첨가된 고기-펩톤 한천으로 제조됩니다. 이 배지에서 가스 괴저의 원인 물질은 한천의 흑화 및 파열을 형성합니다. 성장은 한천 내 깊은 곳에서 발생합니다. 이 경우 Na 2 SO 3 는 Na 2 S(아황산나트륨)로 환원되고, 이는 염화제이철과 결합하여 흑색 황산제1철을 형성합니다. 영양배지의 파열은 가스 형성과 관련이 있습니다.

2번 일하러

모든 생명체와 마찬가지로 미생물도 세 가지 주요 생리적 기능을 가지고 있습니다. 영양, 호흡 및 번식.

주제의 기본 개념:

식민지 - 밀도가 높은 영양배지에서 육안으로 볼 수 있는 미생물 집단으로, 단일 세포에서 자랍니다.

군집은 하나의 세포에서 자란 미생물의 자손입니다. 왜냐하면 군체의 모든 미생물은 하나의 세포에서 자랐으며 동일한 종에 속합니다. 각각의 고립된 콜로니(다른 콜로니와 병합되지 않고 단독으로 서 있음)에는 순수한 배양물이 포함되어 있습니다.

순수문화 - 한 종의 개체로 구성된 미생물 집단.

표시 – 시험물질 내 병원체 검출(속 판별)

식별 – 분리된 순수 배양물의 유형, 유형, biovar, serovar, phagovar의 결정.

3번 일하러

미생물의 호흡– 필요한 물질의 방출로 기질의 생물학적 산화 에너지 대사를 위해.호흡 유형에 따라 미생물은 3가지 주요 그룹으로 나뉩니다. 에어로비산소가 있는 곳에서만 살 수 있습니다(콜레라 비브리오균). 통성혐기성균일정 비율의 산소가 있거나 없이 살 수 있습니다(대장균). 혐기성균(필수)– 산소가 없는 경우에만(가스 괴저의 원인 물질). 절대혐기성균을 배양할 때에는 특별한 조건을 조성해야 한다 혐기성증. 이 경우 특수 장치와 매체(혐기성 장치, 건조기, 티오글리콜레이트, Wilson-Blair 매체)가 사용됩니다.

영양배지는 그 구성과 목적에 따라 분류됩니다.

1.구성별영양 배지는 다음과 같이 구분됩니다. 단순하고 복잡하다

범용 환경 그룹이 있습니다 - 간단합니다. 이 그룹에는 고기-펩톤 국물(단순 영양 국물), 고기-펩톤 한천(단순 영양 한천), 영양가 있는 젤라틴이 포함됩니다. 이 배지는 많은 병원성 미생물을 키우는 데 사용됩니다. 일반 목적 배지 또는 단순 영양 배지는 일반적으로 펩톤과 염화나트륨을 첨가한 가수분해물로부터 제조됩니다. 이는 또한 복잡한 미디어를 준비하기 위한 기초로도 사용됩니다.

또한 구성에 따라 구별됩니다. 단백질, 무단백질 및 미네랄 배지. 2. 원산지별환경으로 나누어져 있습니다 인공과 자연(자연).

천연 영양 배지에는 동물(예: 혈액, 혈청, 담즙) 또는 식물(예: 야채 및 과일 조각) 유래 성분이 포함될 수 있습니다.

3.목적에 따라할당하다 방부제(1차 파종 및 운송용), 농축 환경(특정 박테리아 그룹의 축적을 위해) 문화 매체(보편적 단순, 복합 특수 및 독소 형성용), 분리 및 축적용 배지(보존제, 농축 및 선택적) 및 식별 환경(차동 및 선택 차동).

보존배지병원균의 사멸을 방지하고 부생식물의 성장을 억제합니다. 가장 널리 사용되는 것은 글리세린 혼합물, 고장액, LiCl 2를 함유한 글리세린 방부제, 구연산 나트륨 및 데옥시콜산 나트륨 용액입니다.

박테리아 농축 배지

농축배지(예: Kitta-Tarozzi 배지, 셀레나이트 국물, 티오글리콜레이트 배지)은 일부 종에는 최적이고 다른 종에게는 불리한 조건을 만들어 특정 그룹의 박테리아를 축적하는 데 사용됩니다. 대부분의 경우 담즙염, Na+ 테트라티오네이트, K 텔루라이트, 항생제, 푹신, 용담 바이올렛, 브릴리언트 그린 등 다양한 염료 및 화학 물질이 이러한 약제로 사용됩니다.

미디어도 목적에 따라 구분됩니다. 선택, 특별 및 차등 진단.

선택적인 환경(선택적, 선택적, 축적, 농축).선택적 영양 배지를 만드는 원리는 재배하려는 미생물 유형의 기본적인 생화학적 및 에너지 요구 사항을 충족하거나 동반 미생물의 성장을 억제하는 억제제를 추가하는 것에 기반을 두고 있습니다. 엄격하게 정의된 pH 값에서 특정 구성 및 농도의 영양소, 미량원소, 성장 인자 또는 억제제 추가는 하나 또는 여러 유형의 미생물 배양을 위한 최적의 조건을 제공합니다. 다양한 미생물이 혼합된 물질을 그 위에 파종할 때 환경에 따라 선택적인 종의 성장이 먼저 나타납니다. 선택 배지의 예로는 담즙 국물, 셀레나이트 국물, 플로스키레프 배지(장내 미생물 성장용), 알칼리성 펩톤수(비브리오 콜레라용) 등이 있습니다.

담즙 국물. 10-20%의 황소 담즙이 MPB에 추가됩니다. 담즙은 구균과 기생균의 성장을 억제하지만, 살모넬라균의 증식에는 유리합니다.

셀레나이트 국물. 이는 구균총과 대장균의 성장을 억제하지만 살모넬라균의 성장을 억제하지는 않는 셀레나이트 나트륨염을 첨가한 인산염 국물로 구성됩니다.

수요일 플로스키레바. E. coli, coli의 억제제를 함유하고 있지만 Shigella 및 Salmonella의 성장에 유리하며 빛나는 녹색 염과 담즙 염에 의해 번식이 억제되지 않는 고밀도 배지입니다.

펩톤수. 1% 펩톤과 0.5% 염화나트륨이 함유되어 있습니다. 환경은 콜레라 비브리오에 선택적입니다. 그들은 "배고픈 환경", 특히 알칼리성 반응에서 다른 박테리아보다 더 잘 번식합니다. 왜냐하면 그들 스스로 산성 노폐물을 분비하기 때문입니다.

특수 환경.단순영양배지에서는 자라지 않는 세균을 배양하는데 필요하다. 일부 유기체의 경우 단순 영양 배지에 탄수화물, 혈액 및 기타 추가 영양분을 추가해야 합니다. 단순 영양배지의 예로는 연쇄상구균에 대한 설탕 국물과 설탕 한천(각각 0.5-2% 포도당이 첨가된 MPB와 MPA로 준비됨)이 있습니다.

폐렴구균과 수막구균의 경우 특수 배지는 유청 국물과 유청 한천입니다(유청 국물을 준비하려면 MPB 1부와 신선한 혈청 2부를 혼합합니다. 유청 한천을 얻으려면 10-25% 멸균 말 또는 소 혈청을 녹은 물에 첨가합니다) MPA).

차등 진단 환경신진 대사의 특성을 기반으로 연구중인 미생물의 종을 결정하는 데 사용됩니다. 감별진단 환경은 그 목적에 따라 다음과 같이 구분됩니다.

1. 검출용 매체 단백질 분해 능력우유, 젤라틴, 혈액 등을 함유한 미생물.

2. 탄수화물 및 다가 알코올을 함유한 배지

다양한 감지 당분해효소.

당분해 특성과 산화환원 효소를 식별하기 위해 고안된 감별 진단 배지의 구성에는 중성 적색, 산성 푹신, 브로모티몰 블루, 로솔산(BP)이 함유된 수성 블루 등의 지표가 추가됩니다. 다양한 pH 값에서 색상을 변경함으로써 표시기는 효소의 존재와 배지에 도입된 성분의 분해를 나타냅니다.

차등 진단 환경의 예:

엔도배지. 1% 유당이 첨가된 MPA와 아황산나트륨으로 탈색된 염기성 푹신(지시약)으로 구성됩니다. 엔도 배지는 약간 핑크색을 띠고 있습니다. 유당을 분해하여 산성 생성물을 형성하는 박테리아와 이러한 능력이 없는 박테리아를 구별하기 위해 장 감염 진단에 사용됩니다. 유당 양성 미생물(Escherichia coli)의 군집은 푹신의 환원으로 인해 붉은색을 띕니다. 유당 음성 미생물(살모넬라, 시겔라 등)의 군체는 무색입니다.

차등 진단 환경에는 단기 및 확장이 포함됩니다. 가지각색의 행. 탄수화물이 함유된 배지(Hiss media), MPB, 우유, 고기-펩톤 젤라틴으로 구성됩니다.

히스 미디어화학적으로 순수한 단당류, 이당류 또는 다당류(포도당, 유당, 전분 등)가 첨가된 펩톤수를 기반으로 제조됩니다.

산 형성과 탄수화물 분해로 인한 pH 변화를 감지하기 위해 지표가 배지에 추가됩니다. 탄수화물이 더 깊게 분해되면 기체 생성물(CO 2, CH 4 등)이 형성되며, 이는 플로트를 사용하여 포착됩니다. 작은 시험관을 거꾸로 매체에 내려 놓습니다. 탄수화물이 포함된 배지는 0.5-1% 한천을 첨가하여 밀도가 높은 배지로 준비할 수도 있습니다. 그런 다음 매체 컬럼에 기포(깨짐)가 형성되어 가스 형성이 감지됩니다.

잡종 시리즈의 일부인 MPB에서는 아미노산과 펩톤(인돌, 황화수소)이 분해되는 동안 형성된 생성물이 발견됩니다. 황화수소배양액을 파종한 후 아세트산납 용액에 담근 여과지 조각을 MPB에 넣어 검출합니다. 황을 함유한 아미노산이 분해되면 황화수소가 방출되고, 황화납이 생겨 종이가 검게 변한다. 결정을 위해 인돌복잡한 지표를 사용할 수 있습니다. 인돌은 트립토판이 분해되어 형성되며 이 지표를 MPB에서 배양한 배양물에 첨가하면 검출될 수 있습니다. 인돌이 있으면 MPB는 녹색이나 파란색으로 변합니다.

실제 세균학 실험실에서는 널리 사용됩니다. 마이크로 및 익스프레스 방법미생물의 생화학적 특성에 대한 지표적 연구를 위해 이 목적을 위한 많은 테스트 시스템이 있습니다. 가장 일반적으로 사용되는 지표 용지 시스템 (SIB). SIB는 지시약과 함께 설탕 또는 기타 기질 용액을 함침시킨 여과지 디스크입니다. 이러한 디스크는 액체 영양 배지에서 배양된 배양물과 함께 시험관으로 내려집니다. 기질과 함께 디스크의 색상 변화는 효소의 기능을 판단하는 데 사용됩니다. 장내 세균 식별을 연구하기 위한 마이크로 테스트 시스템은 지표가 추가된 다양한 기질이 포함된 매체가 포함된 일회용 플라스틱 용기로 표시됩니다. 이러한 테스트 시스템에 미생물의 순수 배양물을 뿌리면 구연산염, 포도당, 자당을 활용하고 암모니아, 인돌을 방출하고 요소, 라이신, 페닐알라닌 등을 분해하는 박테리아의 능력을 신속하게 확인할 수 있습니다.

영양 한천과 주요 감별 진단 배지는 현재 필요한 모든 구성 요소를 포함하는 건조 제제 형태로 생산됩니다. 이러한 분말에는 물을 넣고 끓인 다음 부은 후 살균하면됩니다.

이는 개별 종 또는 미생물 그룹을 구별하는 데 사용됩니다. 이러한 배지를 구성하는 원리는 다양한 유형의 미생물이 서로 다른 효소 세트로 인해 생화학적 활성이 서로 다르다는 사실에 기초합니다.

DDS에는 다음이 포함됩니다.

1. 미생물의 증식을 보장하는 영양기초

2. 특정 탄수화물 - 유당

3. 색상 변화가 해당 탄수화물의 발효로 인해 배지의 pH가 산성 쪽으로 이동했음을 나타내는 표시기입니다.

DDS는 장내 미생물 유형을 구별하는 데 적극적으로 사용됩니다.

선택적 배양 배지

다양한 외부 미생물을 함유한 물질로부터 특정 유형(또는 그룹)의 미생물을 선택적으로 분리하고 축적하도록 설계되었습니다. 이러한 환경을 만들 때 미생물을 대부분의 다른 미생물과 구별하는 생물학적 특성을 기반으로 합니다. 예를 들어, 포도상 구균의 선택적 성장은 염분 농도가 증가하고 Vibrio cholerae - 알칼리성 환경에서 관찰됩니다.

유출 매체

1. 페트리 접시의 한천 배지:

a) 수조에서 녹이고 MPA를 사용하여 45-50°С로 식힙니다.

b) 뚜껑이 위로 향하게 컵을 놓으십시오.

c) 오른손으로 그릇을 들고 불 가까이에 두십시오.

d) 왼손으로 플러그를 뽑고 새끼손가락과 손바닥으로 플러그를 잡습니다.

e) 매체로 병의 목 부분을 태우고 왼손 두 손가락으로 뚜껑을 살짝 엽니다.

f) 컵 가장자리를 건드리지 않고 병 목을 그 아래에 삽입하고 15-20ml를 붓습니다. 환경.

배지가 유출된 날 파종을 수행하는 경우 분해된 형태로 항온조에서 20-30분 동안 건조해야 하며 측면이 아래로 향하게 해야 합니다. 다음날 파종을 수행하면 컵을 건조하지 않고 멸균 된 동일한 종이에 싸서 냉장고에 넣습니다.

2. 시험관의 한천배지:

a) 45°C 매체로 용융 및 냉각된 용기를 취합니다.

b) 왼손으로 시험관을 잡는다

c) 오른손으로 시험관의 마개를 제거하고 왼손으로 배지가 담긴 용기에서 새끼손가락과 손바닥으로 마개를 잡습니다.

d) 시험관의 가장자리와 배지가 담긴 용기를 태우고 시험관에 배지 3-5ml를 추가합니다.

e) 용기의 목을 다시 태우고 마개로 닫습니다.

한천 배지는 시험관에서 다음과 같은 형태로 고형화될 수 있습니다.

1. 경 사진 기둥

2. 결합 컬럼

3. 칼럼

경사지고 결합된 컬럼을 얻기 위해, 배지가 시험관의 2/3까지 확장되지 않고 마개가 젖지 않도록 용융된 한천 덩어리가 있는 시험관을 특수 스탠드의 경사진 위치에 놓습니다. 매체가 굳은 후 시험관을 랙에 수직으로 놓고 응축수를 배출시킵니다. 결로가 없는 환경에서는 사용이 불가능합니다. 수조에서 다시 녹여서 깎아야합니다.

고기 펩톤 한천

박테리아에 대한 연구에는 수많은 장비와 도구를 사용하여 세심한 작업이 필요합니다. 실험실 조건에서 미생물이 최대한 빨리 증식하고 정상적인 생명 기능을 유지할 수 있도록 특수 영양 배지가 사용됩니다. 그들의 구성과 생물물리학적 조건은 박테리아 배양의 활발한 성장에 적합합니다.

영양 매체. 미생물학 및 기타 응용

박테리아 군체는 젤리 같은 또는 반액체 내용물로 채워진 페트리 접시의 실험실 조건에서 성장합니다. 이는 작물의 고품질 성장을 위해 그 구성과 특성이 자연에 최대한 가까운 영양 배지입니다.

예를 들어, 이러한 선택적 환경은 대장균의 번식에만 적합합니다. 그런 다음 페트리 접시에 많은 박테리아를 뿌리면 동일한 대장균의 식민지만 볼 수 있고 더 이상 볼 수 없습니다. 작업을 시작하기 전에 다른 종의 혼합물에서 성공적으로 선택하려면 연구 중인 박테리아의 대사에 대한 충분한 지식이 필요합니다.

고체, 반액체 및 액체 영양배지

박테리아는 고체 기질에서만 자랄 수 있는 것이 아닙니다. 영양 배지는 응집 상태가 다르며, 이는 제조 중 구성에 따라 달라집니다. 처음에는 모두 액체 상태이지만 젤라틴이나 한천을 일정 비율로 첨가하면 혼합물이 굳어집니다.

액체 배양 배지는 일반적으로 시험관에서 발견됩니다. 그러한 조건에서 박테리아를 성장시켜야 하는 경우에는 배양 샘플과 함께 용액을 첨가하고 2~3일을 기다리십시오. 결과는 다를 수 있습니다. 침전물이 형성되거나, 막이 나타나거나, 작은 조각이 뜨거나, 탁한 용액이 형성됩니다.

고체 영양 배지는 박테리아 콜로니의 특성을 연구하기 위한 미생물학 연구에 자주 사용됩니다. 이러한 배지는 항상 투명하거나 반투명하므로 미생물 배양물의 색상과 모양을 정확하게 결정할 수 있습니다.

배양 배지의 준비

국물, 젤라틴 또는 한천을 기반으로 한 고기-펩톤 혼합물과 같은 기질은 매우 쉽게 준비됩니다. 고체 또는 반액체 기질을 만들어야 하는 경우 액체에 각각 2-3% 또는 0.2-0.3% 젤라틴 또는 한천을 추가합니다. 이들은 혼합물을 굳히는 데 중요한 역할을 하지만 영양분의 공급원은 아닙니다. 따라서, 박테리아 배양물의 성장에 적합한 영양 배지가 얻어집니다.

감별 진단 매체, 특정 물질에 대해 선택적인 생화학적 활성을 갖는 미생물을 식별하는 데 사용되는 특수 영양 매체. 미생물이 발달하는 동안 효소의 도움으로 환경에 포함된 특정 물질을 분해하는데, 이는 환경 변화에 따라 결정됩니다.

다수의 병원성 미생물은 산과 가스(이산화탄소, 수소, 메탄)를 생성하여 탄수화물과 다가 알코올을 분해하는데, 이는 이들이 특정 그룹 또는 유형의 박테리아에 속함을 나타냅니다. 이러한 특성을 확립하기 위해 액체 또는 반액체 D.-D.가 준비됩니다. 와 함께. 포도당, 유당, 자당, 만노스 및 기타 탄수화물, 다가 알코올(다양한 시리즈), 지표(Andrade, Gissa), 우유가 포함된 배지. 미생물의 효소 능력은 가스의 출현이나 지시약의 색상 변화에 따라 결정됩니다. 포도당으로부터 산 형성의 강도는 전분 한천에서 미생물의 전분 분해 능력인 Voges-Proskauer 반응을 사용하여 아세틸메틸카르보날의 형성인 Clark 배지에서 결정됩니다. 미생물의 단백질 분해 특성은 포도당과 글리세롤을 포함하지 않는 배지(고기-펩톤 젤라틴, 응고된 말 혈청, 우유 한천)에서 결정됩니다. 고기-펩톤 젤라틴을 시험관 바닥에 찔러 접종하고 20~22((°))C에서 배양한 후 젤라틴의 액화 정도를 측정한다. 미생물의 용혈 능력은 혈액 한천 또는 혈액 국물에 도말하여 결정됩니다. 미생물의 환원 활성을 결정하기 위해 D.-d.가 사용됩니다. 와 함께. 염료 (메틸렌 블루, 리트머스, 인디도카민, 티오닌 등). 미생물이 성장함에 따라 전체 또는 부분적인 변색이나 염료 색상의 변화가 발생합니다. 특정 미생물의 효소의 영향으로 질산염이 아질산염으로 환원된 다음 암모니아 또는 유리 질소로 환원되는 질산염이 포함된 배지도 사용됩니다.

미생물의 이동성, 산소와의 관계를 결정하기 위해 혐기성 균(Kitta-Tarozzi 배지 등) 재배, 일부 장내 세균, 살모넬라(Endo, Levin, Simmons, Ploskirev 등) 식별을 위한 특수 선택 배지가 있습니다( Peshkov 배지 ) 등 결핵의 원인 물질은 Petragnani, Livenstein-Jensen, Gelberg의 특수 계란 배지, 부결핵의 원인 물질 - Dubo-Smith 배지, 브루셀라증 - Albini, Weybridge, Korneeva 배지에서 재배됩니다. 비브리오증의 원인 물질 - GNKI 배지. 마이코플라스마는 Edward 배지 및 기타 특수 배지에서 가장 성공적으로 분리되고 유지됩니다. Leptospira - Terskikh, Ulenkhut, Lyubashenko의 혈청 배지, GNKI의 알부민 배지. 양 발 부패의 원인 물질은 발굽뿔 추출물과 황 함유 아미노산을 첨가하여 뇌 배지에서 자랍니다. 버섯 - Saouro, Capek 등의 미디어.