Иммунологические исследования: расшифровка, нормы — «Online Диагноз

Иммунохроматографический анализ. В современной медицинской практике с каждым годом возрастает роль лабораторной диагностики как основного инструмента постановки диагноза и мониторинга терапии. Одним из бурно развивающихся и востребованных методов лабораторной диагностики является иммунохроматографический анализ. ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ (ИХА) - это метод определения наличия определенных концентраций веществ в биологических материалах (моча, цельная кровь, сыворотка или плазма крови, слюна, кал и т.д.). Данный вид анализа осуществляется при помощи индикаторных полосок, палочек, панелей или тест- кассет, которые обеспечивают быстроту проведения тестирования. ИХА - сравнительно молодой метод анализа, он часто обозначается в литературе также как метод сухой иммунохимии, стрип-тест, QuikStrip cassette, QuikStrip dipstick, экспресс-тест или экспресс-анализ. Эти названия связаны с быстротой проведения этого метода анализа. Принцип действия иммунохроматографического теста состоит в том, что при погружении теста в физиологическую жидкость она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Подвижной фазой в данном случае является физиологическая жидкость. Вместе с жидкостью движутся и антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген (гормон, инфекционный или онкологический маркер), то происходит его связывание, как с первым, так и со вторым типом антител, что является уже иммунологическим методом анализа. При этом происходит накопление антител с красителем вокруг антител, жестко иммобилизованных в тест-зоне ИХА-полоски, что проявляется в виде яркой темной полосы. Несвязавшиеся антитела с красителем мигрируют далее вдоль полоски и неизбежно взаимодействуют со вторичными антителами в контрольной зоне, где и наблюдается вторая темная полоса. Взаимодействие (и темная полоса) в контрольной зоне должны проявляться всегда (если анализ проведен правильно), независимо от присутствия исследуемого антигена в физиологической жидкости (см.рис.1). Результаты определяются визуально или компьютерной обработкой отсканированного изображения. Иммунологический метод анализа основан на реакции между антигеном и соответствующим ему антителом. Антиген - это вещество, которое чужеродное для организма человека и которое может запустить иммунную систему (защитную реакцию). Антитела - это белки, которые выделяются клетками нашего организма при внедрении в него антигена. Метод имунной хроматографии основан на особенном свойстве антител связываться с антигеном специфическим (то есть избирательным) образом. Это означает, что каждое антитело узнает и связывается только с определенным антигеном. На этой уникальной особенности антител и основаны все иммунологические методы анализа в том числе и ИХА. Причем определяемым «антигеном» в данном методе анализа может служить и определяемое в биоматериале антитело к инфекционному агенту или аутоантитело, тогда остальные используемые в тесте антитела будут являться антиантителами. В ИХА- тестах используется три типа антител. 1. Растворимые моноклональные антитела к исследуемому антигену или антителу, конъюгированные ("сшитые") с коллоидным золотом - красителем, который можно легко идентифицировать даже в самых малых концентрациях. Эти антитела нанесены вблизи участка погружения тест-полоски в физиологическую жидкость (мочу, кровь). 2. Поликлональные антитела к исследуемому антигену или антителу, жестко иммобилизованные в тест-зоне полоски. 3. Вторичные антитела к моноклональным антителам, жестко иммобилизованные в контрольной зоне тест-полоски. Принцип работы тестов на наркотики несколько отличается от других тест- систем. Устройство ИХА-полоски отличается тем, что в тест-зоне иммобилизованы искусственные антигены, способные специфически связываться со свободными антителами. Если исследуемый антиген (наркотик) НЕ присутствует в физиологической жидкости, участки связывания антител (эпитопы) остаются свободными, и они способны связываться с искусственными антигенами в тест-зоне, образуя темную полосу за счет конъюгированного красителя. Соответственно если исследуемый антиген присутстствует в жидкости, то антитела, связавшись с ним, уже не могут взаимодействовать с антигенами в тест-зоне и образования темной полосы там не происходит. Но в обоих случаях (если анализ проведен правильно) происходит связывание "окрашенных" антител со вторичными антителами в контрольной зоне и образование там темной полосы. Возможные варианты при проведении анализа: одна полоса - положительный результат, две полосы - отрицательный результат, нет полос - анализ проведен неправильно. Основными преимуществами использования иммунохроматографических тест полосок являются: 1) Простота и удобство - позволяет получить результат (анализ и первичное представление о причине заболевания) без оборудования и специальных навыков 2) Надежность - достоверность тестов достигает 92-99,8%, при этом каждый тест имеет встроенный внутренний контроль 3) Экономичность - минимальные затраты на приобретение теста и экономия времени на проведение обследования. В рознице стоимость одного ИФА-исследования в 5-10 раз дороже ИХА и получение результата минимум на следующий день 4) Анонимность - что особенно важно при выявлении заболеваний, передаваемых половым путем, других инфекционных заболеваний, а также выявлении фактов употребления наркотических веществ 5) Независимость - не требует предварительной медицинской консультации и рецепта врача Являясь эффективным средством диагностирования, экспресс-тесты позволяют визуально в течение нескольких минут определить и оценить содержание антигенов, антител, гормонов и других диагностически важных веществ в организме человека. Экспресс-тесты отличаются высокой степенью чувствительности и точности, обнаруживая более 100 видов заболеваний, включающих такие распространённые болезни как туберкулёз, сифилис, гонорею, хламидиоз, различные виды вирусных гепатитов, и др., а также всю гамму применяемых наркотических веществ при высокой достоверности определения. Важным преимуществом данного вида тестов является их применение в диагностике in vitro, не требующей непосредственного присутствия обследуемого пациента. Однако иммунохроматографические тест-полоски не лишены недостатков. Касается это надежности, чувствительности и экономичности тестов. Надежность и чувствительность зависит, во-первых, от качества используемых в тесте моноклональных антител и, во-вторых, от концентрации антигена в биоматериале. Качество моноклональных антител зависит от способов их получения, очистки и фиксации на носителе. Концентрация антигена – от стадии заболевания и количества биоматериала. Количество биоматериала особенно важно при использовании цельной крови. При этом существенную роль играет гематокрит, т.е. соотношение плазмы и форменных элементов. При высоком гематокрите снижается количество плазмы с антигеном, мигрирующей вдоль полоски. Температура, от которой зависит скорость взаимодействие антитела с антигеном, важна только для времени постановки теста. Понятно, что использовать полоски при температуре ниже точки замерзания воды, составляющей основную часть биоматериала, не имеет смысла. Вызывает большие сомнения экономичность использования экспресс-тестов в бюджетных медицинских организациях, которые занимаются массовой диспансеризацией населения и которым как раз-то удобны и необходимы комплексные стрип-системы из тест-полосок для скринингового выявления различных заболеваний. Обусловлено это низкой стоимостью анализа по бюджетным расценкам. При этом себестоимость тест-полоски в некоторых случаях в 10 раз превосходит оплату анализа. Список литературы. 1) Wennig R, Moeller MR, Haguenoer JM et al. (1998) Development and evaluation of immunochromatographic rapid tests for screening of cannabinoids, cocaine, and opiates in urine // J. Anal. Toxicol. - V.22 - P.148-155 2) Coons, S.J. A look at the purchase and use of home pregnancy-test kits. Am.Pharm. NS29:46-48, 1989. 3) Bastian, L.A., Nanda, K., Hasselblad, V., and Simel, D.L. Diagnostic efficiency of home pregnancy test kits. A meta-analysis. Arch.Fam.Med. 7:465-469, 1998. 4) Latman, N.S. and Bruot, B.C. Evaluation of home pregnancy test kits. Biomed.Instrum.Technol. 23:144-149, 1989. 5) Hicks, J.M. and Iosefsohn, M. Reliability of home pregnancy-test kits in the hands of laypersons . N.Engl.J.Med. 320:320-321, 1989. 6) Torlesse, H., Wurie, I.M., and Hodges, M. The use of immunochromatography test cards in the diagnosis of hepatitis B surface antigen among pregnant women in West Africa. Br.J.Biomed.Sci. 54:256-259, 1997. 7) Sato, K., Ichiyama, S., Iinuma, Y., Nada, T., Shimokata, K., and Nakashima, N. Evaluation of immunochromatographic assay systems for rapid detection of hepatitis B surface antigen and antibody, Dainascreen HBsAg and Dainascreen Ausab. J.Clin.Microbiol. 34:1420- 1422, 1996. 8) Lein, M., Jung, K., Schnorr, D., Henke, W., Brux, B., and Loening, S.A. Rapid screening of PSA: evaluation of an immunochemical membrane strip test . Clin.Chem. 41:1545-1547, 1995. 9) Anderson, J.C., Cheng, E., Roeske, M., Marchildon, P., Peacock, J., and Shaw, R.D. Detection of serum antibodies to Helicobacter pylori by an immunochromatographic method. Am.J.Gastroenterol. 92:1135-1139, 1997. 10) Schrier, W.H., Schoengold, R.J., Baker, J.T., Norell, J.L., Jaseph, C.L., Okin, Y., Doe, J.Y., and Chandler, H. Development of FlexSure HP- -an immunochromatographic method to detect antibodies against Helicobacter pylori. Clin.Chem. 44:293-298, 1998. 11) Cognein, P., Costa, A., and Giacosa, A. Serodiagnosis of Helicobacter pylori: evaluation of a rapid, miniaturized immunochromatographic test. Eur.J.Cancer.Prev. 3:457-463, 1994. 12) Shirin, H., Bruck, R., Kenet, G., Krepel, Z., Wardi, Y., Reif, S., Zaidel, L., Geva, D., Avni, Y., and Halpern, Z. Evaluation of a new immunochromatographic test for Helicobacter pylori IgG antibodies in elderly symptomatic patients . J.Gastroenterol. 34:7-10, 1999. 13) Kagen, L. J. 1973 Myoglobin: Biochemical, physiological and clinical aspects. New York and London Colombian University Press. 14) Drexel, H. et al. 1983 Myoglobinaemia in the early diagnosis of acute myocradial infarction. Am. Heart J. 105: 642-651. 15) McComb, J. M. et al. 1983 Myoglobin in the very early phase of acute myocardial infaretion. Ann Clin. Biochem, 22:152-155. 16) Grenardier, E., Keidar, S., Kahana, L., Alpan, G., Marmur, A., Palant, A. 1983 The roles of serum myoclobin, total CPK, and CK-MB isoenzyme in the acute phase of myocardial infarction. Am. Heart J. 105:408-416. 17) Ellis A. K., Saran, B.R. 1989 Kinetics of myoolobin release and prediction of myocardial myoglobin depletion after coronary artery reperfusion. Circulation 80: 676-682. 18) McComb, J.M. et al. 1984 Myoglobin and creatine kinase in acute myocardial infarction. Br. Heart J. 51:189-194. 19) Struyf, F., Lemmens, A., Valadas, E., Verhaegen, J., and Van Ranst, M. Usefulness of immunochromatographic detection of antibodies to Mycobacterium tuberculosis as an adjunct to auramine staining for rapid diagnosis of tuberculosis in a low-prevalence setting. Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 18:740-742, 1999. 20) Abe, C., Hirano, K., and Tomiyama, T. Simple and rapid identification of the Mycobacterium tuberculosis complex by immunochromatographic assay using anti-MPB64 monoclonal antibodies. J.Clin.Microbiol. 37:3693-3697, 1999. 21) Edmund C. Tramont. Traponema pallidum (Syphilis). In Mandell, Douglas and Bennett"s Principles and Practice of infectious Diseases. G.L. Mandell, J.E. Bennett, P. Dolin, eds. Churchill Livingston New York, 1995. 22) Steven J. Norris and Sandra A larsen, Traponema and Other Host- Associated Spirochemetes in Manual of Clinical Microbiology. P. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, R.H. Yoken, eds, ASM Press , Washington D.C. 1995. 23) Larsen, S.A., E.F. Hunter, & S.J. Draus (ed.) 1990. A Manual of Tests for Syphilis, 8th ed. American Public Health Association, Washington D.C. ----------------------- Рис.1 I - Положительный результат: Появление двух темных полос в тест- зоне(Т) и контрольной зоне(К). II - Отрицательный результат: Появление только одной темной полосы в контрольной зоне. - исследуемый антиген; - коньюгат антитела, специфичного к исследуемому антигену, с красителем, мигрирующем вдоль полоски, вместе с физиологической жидкостью; - антитело,специфичное к исследуемому антигену, иммобилизованное на тест- полоске; - вторичное антитело,специфичное к антителам с красителем, иммобилизованное на тест-полоске. Условные обозначения: II I Рис.2 II - Положительный результат: Появление только одной темной полосы в контрольной зоне. II - Отрицательный результат: Появление двух темных полос в тест-зоне(Т) и контрольной зоне(К). - исследуемый антиген; - коньюгат антитела, специфичного к исследуемому антигену, с красителем, мигрирующем вдоль полоски, вместе с физиологической жидкостью; - искусственный антиген, иммобилизованное на тест-полоске; - вторичное антитело,специфичное к антителам с красителем, иммобилизованное на тест-полоске. Условные обозначения: II I

Иммунохроматографический анализ.

В современной медицинской практике с каждым годом возрастает роль

лабораторной диагностики как основного инструмента постановки диагноза и

мониторинга терапии. Одним из бурно развивающихся и востребованных методов

лабораторной диагностики является иммунохроматографический анализ.

ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ (ИХА) - это метод определения наличия

определенных концентраций веществ в биологических материалах (моча, цельная

кровь, сыворотка или плазма крови, слюна, кал и т.д.). Данный вид анализа

осуществляется при помощи индикаторных полосок, палочек, панелей или тест-

кассет, которые обеспечивают быстроту проведения тестирования. ИХА -

сравнительно молодой метод анализа, он часто обозначается в литературе

также как метод сухой иммунохимии, стрип-тест, QuikStrip cassette,

QuikStrip dipstick, экспресс-тест или экспресс-анализ. Эти названия связаны

с быстротой проведения этого метода анализа.

Принцип действия иммунохроматографического теста состоит в том, что при

погружении теста в физиологическую жидкость она начинает мигрировать вдоль

полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Подвижной фазой в данном

случае является физиологическая жидкость. Вместе с жидкостью движутся и

антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый

антиген (гормон, инфекционный или онкологический маркер), то происходит его

связывание, как с первым, так и со вторым типом антител, что является уже

иммунологическим методом анализа. При этом происходит накопление антител с

красителем вокруг антител, жестко иммобилизованных в тест-зоне ИХА-полоски,

что проявляется в виде яркой темной полосы. Несвязавшиеся антитела с

вторичными антителами в контрольной зоне, где и наблюдается вторая темная

полоса. Взаимодействие (и темная полоса) в контрольной зоне должны

проявляться всегда (если анализ проведен правильно), независимо от

присутствия исследуемого антигена в физиологической жидкости (см.рис.1).

Результаты определяются визуально или компьютерной обработкой

отсканированного изображения.

Иммунологический метод анализа основан на реакции между антигеном и

соответствующим ему антителом. Антиген - это вещество, которое чужеродное

для организма человека и которое может запустить иммунную систему (защитную

реакцию). Антитела - это белки, которые выделяются клетками нашего

организма при внедрении в него антигена. Метод имунной хроматографии

основан на особенном свойстве антител связываться с антигеном специфическим

(то есть избирательным) образом. Это означает, что каждое антитело узнает и

связывается только с определенным антигеном. На этой уникальной особенности

антител и основаны все иммунологические методы анализа в том числе и ИХА.

Причем определяемым «антигеном» в данном методе анализа может служить и

определяемое в биоматериале антитело к инфекционному агенту или

аутоантитело, тогда остальные используемые в тесте антитела будут являться

антиантителами. В ИХА- тестах используется три типа антител.

1. Растворимые моноклональные антитела к исследуемому антигену или

антителу, конъюгированные ("сшитые") с коллоидным золотом -

красителем, который можно легко идентифицировать даже в самых

малых концентрациях. Эти антитела нанесены вблизи участка

погружения тест-полоски в физиологическую жидкость (мочу, кровь).

2. Поликлональные антитела к исследуемому антигену или антителу,

жестко иммобилизованные в тест-зоне полоски.

3. Вторичные антитела к моноклональным антителам, жестко

иммобилизованные в контрольной зоне тест-полоски.

Принцип работы тестов на наркотики несколько отличается от других тест-

систем. Устройство ИХА-полоски отличается тем, что в тест-зоне

иммобилизованы искусственные антигены, способные специфически связываться

со свободными антителами. Если исследуемый антиген (наркотик) НЕ

присутствует в физиологической жидкости, участки связывания антител

(эпитопы) остаются свободными, и они способны связываться с искусственными

антигенами в тест-зоне, образуя темную полосу за счет конъюгированного

красителя. Соответственно если исследуемый антиген присутстствует в

жидкости, то антитела, связавшись с ним, уже не могут взаимодействовать с

антигенами в тест-зоне и образования темной полосы там не происходит. Но в

обоих случаях (если анализ проведен правильно) происходит связывание

"окрашенных" антител со вторичными антителами в контрольной зоне и

образование там темной полосы. Возможные варианты при проведении анализа:

одна полоса - положительный результат, две полосы - отрицательный

результат, нет полос - анализ проведен неправильно.

Основными преимуществами использования иммунохроматографических тест

полосок являются:

1) Простота и удобство - позволяет получить результат (анализ и

первичное представление о причине заболевания) без оборудования и

специальных навыков

2) Надежность - достоверность тестов достигает 92-99,8%, при этом

каждый тест имеет встроенный внутренний контроль

3) Экономичность - минимальные затраты на приобретение теста и

экономия времени на проведение обследования. В рознице стоимость

одного ИФА-исследования в 5-10 раз дороже ИХА и получение

результата минимум на следующий день

4) Анонимность - что особенно важно при выявлении заболеваний,

передаваемых половым путем, других инфекционных заболеваний, а

также выявлении фактов употребления наркотических веществ

5) Независимость - не требует предварительной медицинской

консультации и рецепта врача

Являясь эффективным средством диагностирования, экспресс-тесты

позволяют визуально в течение нескольких минут определить и оценить

веществ в организме человека. Экспресс-тесты отличаются высокой степенью

чувствительности и точности, обнаруживая более 100 видов заболеваний,

включающих такие распространённые болезни как туберкулёз, сифилис, гонорею,

хламидиоз, различные виды вирусных гепатитов, и др., а также всю гамму

применяемых наркотических веществ при высокой достоверности определения.

Важным преимуществом данного вида тестов является их применение в

диагностике in vitro, не требующей непосредственного присутствия

обследуемого пациента.

Однако иммунохроматографические тест-полоски не лишены недостатков.

Касается это надежности, чувствительности и экономичности тестов.

Надежность и чувствительность зависит, во-первых, от качества используемых

в тесте моноклональных антител и, во-вторых, от концентрации антигена в

биоматериале. Качество моноклональных антител зависит от способов их

получения, очистки и фиксации на носителе. Концентрация антигена – от

стадии заболевания и количества биоматериала. Количество биоматериала

особенно важно при использовании цельной крови. При этом существенную роль

играет гематокрит, т.е. соотношение плазмы и форменных элементов. При

высоком гематокрите снижается количество плазмы с антигеном, мигрирующей

вдоль полоски. Температура, от которой зависит скорость взаимодействие

антитела с антигеном, важна только для времени постановки теста. Понятно,

что использовать полоски при температуре ниже точки замерзания воды,

составляющей основную часть биоматериала, не имеет смысла.

Вызывает большие сомнения экономичность использования экспресс-тестов в

бюджетных медицинских организациях, которые занимаются массовой

диспансеризацией населения и которым как раз-то удобны и необходимы

комплексные стрип-системы из тест-полосок для скринингового выявления

различных заболеваний. Обусловлено это низкой стоимостью анализа по

бюджетным расценкам. При этом себестоимость тест-полоски в некоторых

случаях в 10 раз превосходит оплату анализа.

Список литературы.

1) Wennig R, Moeller MR, Haguenoer JM et al. (1998) Development and

evaluation of immunochromatographic rapid tests for screening of

cannabinoids, cocaine, and opiates in urine // J. Anal. Toxicol. -

V.22 - P.148-155

2) Coons, S.J. A look at the purchase and use of home pregnancy-test

kits. Am.Pharm. NS29:46-48, 1989.

3) Bastian, L.A., Nanda, K., Hasselblad, V., and Simel, D.L. Diagnostic

efficiency of home pregnancy test kits. A meta-analysis. Arch.Fam.Med.

7:465-469, 1998.

4) Latman, N.S. and Bruot, B.C. Evaluation of home pregnancy test kits.

Biomed.Instrum.Technol. 23:144-149, 1989.

5) Hicks, J.M. and Iosefsohn, M. Reliability of home pregnancy-test kits

in the hands of laypersons . N.Engl.J.Med.

320:320-321, 1989.

6) Torlesse, H., Wurie, I.M., and Hodges, M. The use of

immunochromatography test cards in the diagnosis of hepatitis B

surface antigen among pregnant women in West Africa. Br.J.Biomed.Sci.

54:256-259, 1997.

7) Sato, K., Ichiyama, S., Iinuma, Y., Nada, T., Shimokata, K., and

Nakashima, N. Evaluation of immunochromatographic assay systems for

rapid detection of hepatitis B surface antigen and antibody,

Dainascreen HBsAg and Dainascreen Ausab. J.Clin.Microbiol. 34:1420-

8) Lein, M., Jung, K., Schnorr, D., Henke, W., Brux, B., and Loening,

S.A. Rapid screening of PSA: evaluation of an immunochemical membrane

strip test . Clin.Chem. 41:1545-1547, 1995.

9) Anderson, J.C., Cheng, E., Roeske, M., Marchildon, P., Peacock, J.,

and Shaw, R.D. Detection of serum antibodies to Helicobacter pylori by

an immunochromatographic method. Am.J.Gastroenterol. 92:1135-1139,

10) Schrier, W.H., Schoengold, R.J., Baker, J.T., Norell, J.L., Jaseph,

C.L., Okin, Y., Doe, J.Y., and Chandler, H. Development of FlexSure HP-

An immunochromatographic method to detect antibodies against

Helicobacter pylori. Clin.Chem. 44:293-298, 1998.

11) Cognein, P., Costa, A., and Giacosa, A. Serodiagnosis of Helicobacter

pylori: evaluation of a rapid, miniaturized immunochromatographic

test. Eur.J.Cancer.Prev. 3:457-463, 1994.

12) Shirin, H., Bruck, R., Kenet, G., Krepel, Z., Wardi, Y., Reif, S.,

Zaidel, L., Geva, D., Avni, Y., and Halpern, Z. Evaluation of a new

immunochromatographic test for Helicobacter pylori IgG antibodies in

elderly symptomatic patients . J.Gastroenterol. 34:7-10,

13) Kagen, L. J. 1973 Myoglobin: Biochemical, physiological and clinical

aspects. New York and London Colombian University Press.

14) Drexel, H. et al. 1983 Myoglobinaemia in the early diagnosis of acute

myocradial infarction. Am. Heart J. 105: 642-651.

15) McComb, J. M. et al. 1983 Myoglobin in the very early phase of acute

myocardial infaretion. Ann Clin. Biochem, 22:152-155.

16) Grenardier, E., Keidar, S., Kahana, L., Alpan, G., Marmur, A., Palant,

A. 1983 The roles of serum myoclobin, total CPK, and CK-MB isoenzyme

in the acute phase of myocardial infarction. Am. Heart J. 105:408-416.

17) Ellis A. K., Saran, B.R. 1989 Kinetics of myoolobin release and

prediction of myocardial myoglobin depletion after coronary artery

reperfusion. Circulation 80: 676-682.

18) McComb, J.M. et al. 1984 Myoglobin and creatine kinase in acute

myocardial infarction. Br. Heart J. 51:189-194.

19) Struyf, F., Lemmens, A., Valadas, E., Verhaegen, J., and Van Ranst, M.

Usefulness of immunochromatographic detection of antibodies to

Mycobacterium tuberculosis as an adjunct to auramine staining for

rapid diagnosis of tuberculosis in a low-prevalence setting.

Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 18:740-742, 1999.

20) Abe, C., Hirano, K., and Tomiyama, T. Simple and rapid identification

of the Mycobacterium tuberculosis complex by immunochromatographic

assay using anti-MPB64 monoclonal antibodies. J.Clin.Microbiol.

37:3693-3697, 1999.

21) Edmund C. Tramont. Traponema pallidum (Syphilis). In Mandell, Douglas

and Bennett"s Principles and Practice of infectious Diseases. G.L.

Mandell, J.E. Bennett, P. Dolin, eds. Churchill Livingston New York,

22) Steven J. Norris and Sandra A larsen, Traponema and Other Host-

Associated Spirochemetes in Manual of Clinical Microbiology. P.

Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, R.H. Yoken, eds, ASM

Press , Washington D.C. 1995.

23) Larsen, S.A., E.F. Hunter, & S.J. Draus (ed.) 1990. A Manual of Tests

for Syphilis, 8th ed. American Public Health Association, Washington

-----------------------

Рис.1 I - Положительный результат: Появление двух темных полос в тест-

зоне(Т) и контрольной зоне(К). II - Отрицательный результат: Появление

только одной темной полосы в контрольной зоне.

Исследуемый антиген;

Антитело,специфичное к исследуемому антигену, иммобилизованное на тест-

на тест-полоске.

Условные обозначения:

Рис.2 II - Положительный результат: Появление только одной темной полосы в

контрольной зоне. II - Отрицательный результат: Появление двух темных полос

в тест-зоне(Т) и контрольной зоне(К).

Исследуемый антиген;

Коньюгат антитела, специфичного к исследуемому антигену, с красителем,

мигрирующем вдоль полоски, вместе с физиологической жидкостью;

Искусственный антиген, иммобилизованное на тест-полоске;

Вторичное антитело,специфичное к антителам с красителем, иммобилизованное

Иммунохроматографический анализ (ИХА) - метод, основанный на разделении частиц методом парной связки и реакции между антигеном и соответствующим ему антителом в биологических материалах (моча, слюна, цельная кровь, сыворотка или плазма крови и т.п.). Данный вид анализа проводится с помощью специальных экспресс-тестов, тест-полосок или тест-кассет.

Антиген - это вещество, которое определяется организмом человека как чужеродное и которое может запускать иммунную (защитную) реакцию.

Антитела - это белки, образующиеся клетками организма человека в ответ на внедрение в него антигена.

Одним из самых важным свойством антител является их способность избирательно связываться с антигеном. Это означает, что каждое антитело связывается только с определенным антигеном. На этой уникальной особенности антител и основаны все иммунологические методы анализа, в том числе и ИХА.

Принцип действия иммунохроматографического теста

При погружении теста в физиологическую жидкость она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с жидкостью движется жидкая фаза тест полоски содержащая антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген (гормон, онкологический или инфекционный маркер), то происходит его связывание, как с первым типом антител, так и со вторым. При этом происходит накопление антител с красителем вокруг антител. Визуально накопление антител с красителем проявляется в виде окрашивания тест полоски. Свободные антитела с красителем мигрируют далее вдоль полоски и неизбежно взаимодействуют с вторичными антителами в контрольной зоне, где и наблюдается вторая окрашенная (контрольная) полоса.

К - контрольная полоса

Т - тест зона

В экспресс-тестах используются три типа антител:

Подвижные моноклональные антитела к исследуемому антигену или антителу, конъюгированные ("сшитые") с коллоидным золотом - красителем, который можно легко идентифицировать даже в самых малых концентрациях. Эти антитела нанесены вблизи участка погружения тест-полоски в физиологическую жидкость.
Поликлональные антитела к исследуемому антигену или антителу, жестко иммобилизованные в тест-зоне полоски.
Вторичные антитела к моноклональным антителам, жестко иммобилизованные в контрольной зоне тест-полоски.

Взаимодействие (и окрашенная полоса) в контрольной зоне должны проявляться всегда, если анализ проведен правильно, независимо от присутствия исследуемого антигена в исследуемом субстрате.

Показания к проведению иммунологических исследований

врожденные или приобретенные в ходе жизни иммунодефицитные состояния;
аллергические заболевания, не реагирующие на эффективную терапию;
инфекционные болезни хронического и вялотекущего типа;
аутоиммунные и онкологические болезни;
до и после операции по пересадке органов;
подготовка к серьезным хирургическим вмешательствам;
оценка эффективности разработанного лечения и анализа побочных явлений при назначении препаратов, влияющих на иммунитет.

Иммунологическое исследование крови (иммунограмма) расшифровка:

Иммуноглобулин А (IgA)

Иммуноглобулин А (IgA) — это антитела, являющиеся защитным фактором слизистых оболочек человеческого организма. Входят в состав фракции б-глобулинов, составляют около 15% от общего количества иммуноглобулинов сыворотки крови. Содержатся в молоке, слюне, слезной жидкости, секретах слизистых оболочек.

Увеличение содержания:

хронические заболевания печени;
системная красная волчанка;
ревматоидный артрит;
миеломная болезнь;
гломерулонефрит;
алкогольное поражение внутренних органов.

физиологическое снижение у детей младше 6 месяцев;
цирроз печени;
лучевая болезнь,
отравления (толуол, бензин, ксилол);
применение цитостатиков и иммунодепрессантов.

Иммуноглобулин Е (IgE)

атаксия;
телеангиоэктазии.

Иммуноглобулин G (IgG)

Иммуноглобулин G (IgG) обеспечивает пассивный иммунитет.

Увеличение содержания:

ревматизм;
системная красная волчанка;
ревматоидный артрит;
миеломная болезнь;
инфекционный мононуклеоз;
острые и хронические инфекционные заболевания.

лучевая болезнь,
лечение цитостатиками и иммунодепрессантами,
отравления (толуол, бензин, ксилол),
цирроз печени.

Иммуноглобулин М (IgM)

Иммуноглобулин М (IgM) входит в состав фракции у-глобулинов. Первым появляется после введения антигена. К IgM относятся противоинфекционные антитела, антитела групп крови, ревматоидный фактор.

физиологическое снижение у детей младше 6 месяцев,
спленэктомия,
лучевая болезнь,
лечение иммунодепрссантами и цитостатиками,
отравления (толуол, ксилол).

Аллоиммунные антитела

Аллоиммунные антитела — это антитела к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, в первую очередь, к резус-фактору.

беременность (профилактика резус-конфликта),
наблюдение за беременными с отрицательным резус-фактором,
невынашивание беременности,
гемолитическая болезнь новорожденных,
подготовка к переливанию крови.

Антинуклеарный фактор

Антинуклеарный фактор при определении совместно с антителами к ДНК является диагностические критерием системной красной волчанки.

Повышение показателя:

системная красная волчанка,
хронический гепатит,
ревматоидный артрит,
волчаночный нефрит,
системные васкулиты.

Антистрептолизин-О

Антистрептолизин-О — маркер наличия стрептококковой инфекции в организме, является лабораторным критерием ревматизма.