Реакция торможения гемагглютинации ртга. Реакция задержки гемагглютинации. Смотреть что такое "Гемагглютинации реакция торможения" в других словарях

Многие вирусы обладают способностью агглютинировать эритроциты строго определенных видов млекопитающих и птиц. Так, вирусы гриппа и эпидемического паротита агглютинируют эритроциты кур, морских свинок, человека, а аденовирусы – эритроциты крыс, мышей. В связи с этим для их обнаружения в материале больных или культурах клеток, эмбрионов и животных ставят реакцию гемагглютинации (РГА). Для этого в лунках планшетов готовят двукратно возрастающие разведения вируссодержащих материалов и жидкостей, добавляя к ним отмытые изотоническим раствором взвеси NaCl эритроцитов. Для контроля спонтанной агглютинации эритроциты смешивают ещё с равным объемом изотонического раствора NaCl. Смеси инкубируют в термостате при температуре 37°С или при комнатной температуре.

Результаты РГА учитывают по характеру агглютинации эритроцитов через 30–60 мин, когда они обычно полностью осаждаются в контроле. Положительная реакция обозначается плюсами. «++++» –осадок в виде «зонтика», «+++» – осадок с просветами, «++» – осадок с большими просветами, «+» –хлопьевидный осадок, окруженный зоной скомкованных эритроцитов, и «–» – такой же резко очерченный осадок эритроцитов в виде «пуговицы», как и в контроле

Являясь группоспецифической, РГА не дает возможности определить видовую принадлежность вирусов. Их идентифицируют с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Для ее постановки используют заведомо известные иммунные противовирусные сыворотки, которые в двукратно снижающихся концентрациях разводят в изотоническом растворе натрия хлорида и разливают по лункам. К каждому их разведению добавляют равное количество вируссодержащей жидкости. Контролем является взвесь вируса в изотоническом растворе натрия хлорида. Планшеты со смесью сывороток и вируса выдерживают в термостате 30 мин или при комнатной температуре 2 ч, затем в каждую из них добавляют взвесь эритроцитов. Спустя 30 мин определяют титр вируснейтрализующей сыворотки (т.е. максимальное ее разведение), вызвавшей задержку агглютинации эритроцитов.

Используют РТГА в серологической диагностике вирусных болезней, в частности гриппа и аденовирусных инфекций. Ставить ее лучше так же, как и РН, с парными сыворотками. Четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке подтверждает предполагаемый диагноз

5 Реакция нейтрализации вирусов . Данная реакция используется для идентификации вирусов. Для этого к исследуемому материалу, содержащему неизвестный вирус, добавляют специфическую противовирусную сыворотку. После инкубации эту смесь вводят либо в куриный эмбрион, либо лабораторному животному, либо в культуру клеток. Наиболее распространена реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток. Здесь в культуральную среду добавляется индикатор. Если антитела соответствуют вирусу (нейтрализуют его), то клеточная культура развивается нормально. При этом происходит выделение кислых продуктов клеточного метаболизма, рН среды снижается, и индикатор изменяет свой цвет. В контроле вирус быстро разрушает клеточную культуру, рН не меняется, и цвет среды остается прежним.

Реакция нейтрализации.

Идентифицировать вирус по характеру его действия на монослой культуры клеток, которые он разрушает или вызывает в них разного рода структурные изменения, очень трудно, и поэтому прибегают к постановке реакции нейтрализации (РН) вирусов заведомо известными вируснейтрализующими сыворотками. С этой целью полученный от больного вирус накапливают в культуре клеток и различные его разведения смешивают с неразведенной противовирусной сывороткой или, наоборот, постоянную дозу вируса добавляют к различным разведениям иммунной сыворотки. Смеси инкубируют в термостате. После этого смесями вируса и сыворотки заражают культуру клеток и о нейтрализующей силе ее антител судят по отсутствию цитопатического действия на клетки Смесью вирусов и сывороток можно заражать куриные эмбрионы или чувствительных животных. В таких случаях нейтрализующую активность антител определяют по предотвращению развития патологических изменений на хорионаллантоисной оболочке; нейтрализации вирусных гемагглютининов в жидкостях эмбриона, устранению летального действия вируса на животных

Подобным образом с помощью РН идентифицируются вирусы, выделенные из материала больных при заражении им куриных эмбрионов и животных. В таких случаях к вируснейтрализующим сывороткам прибавляют вируссодержащие жидкости эмбрионов и взвеси пораженных органов животных. После определенного времени инкубации смесями инфицируют культуры клеток, куриные эмбрионы и животных.

В серодиагностике вирусных инфекций РН определяют вирус–нейтрализующие антитела в сыворотке больных по известному вирусу. Ставят ее в динамике с парными сыворотками, одну из которых берут в разгаре заболевания, а вторую – спустя 2–3 недели, и по четырехкратному нарастанию титра антител в этой последней подтверждают диагноз.

Гемагглютинации реакция торможения

серол. реакции, основанные на торможении агглютинации эритроцитов. Применяют 2 вида Г. т. р: реакция торможения активной (РТГА) и пассивной (РТПГА) Гемагглютинации. РТГА используют для серодиагностики вирусных инфекций и типирования неизвестных вирусов. В первом варианте к сериям двукратных разведении с-к б-ного, взятых в начале болезни и спустя 10-14 дней в объеме 0,25 мл, добавляют по 0,25 мл стандартного вирусного диагностикума. После часовой экспозиции при комнатной температуре в каждую пробирку (лунку) доливают по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Через 30 - 60 мин в обоих рядах определяют последние разведения с-к, в к-рых отмечено торможение (отсутствие) Гемагглютинации. В случае нарастания титра Ат в 4 раза и более дают положительный ответ, в остальных случаях - отрицательный. Для типирования вирусов готовят серии двукратных разведении стандартной типовой с-ки в объеме 0,25 мл, к каждому разведению добавляют равный объем иссл. вирусной суспензии активностью в 4 гемаг-глютинирующие ед. (дозы), выдерживают при комнатной температуре 1 ч и доливают по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Учет осуществляют так же, как и в предыдущем варианте. Вирус признают идентичным с-ке, если РТГА достигает титра или 1/2 титра стандартной с-ки. К тому и др. варианту ставят 3 контроля: с-ки, вируса, эритроцитов. РТПГА обычно проводят для обнаружения бактериальных, грибковых, протозойных Аг (гаптенов) в иссл. материале. Она высокочувствительна, специфична, но трудоемка в постановке. РТПГА осуществляют также в 2 этапа. На 1-м этапе к серии двукратных разведений иссл. на Аг материала добавляют равный (обычно 0,25 мл) объем стандартной иммунной с-ки, взятой в рабочей дозе. Пробирки выдерживают в термостате 2 ч. При наличии соответствующего с-ке Аг в материале имеет место связывание Ат и при последующем добавлении эритроцитарного диагностикума в ряде пробирок (и в зависимости от количества Аг) происходит торможение агглютинации сенсибилизированных эритроцитов. Опыт сопровождают контролями с-ки, эритроцитов и материала.

(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)

Смотреть что такое "Гемагглютинации реакция торможения" в других словарях:

реакция торможения гемагглютинации - РТГА Лабораторный, серологический метод. [Англо русский глоссарий основных терминов по вакцинологии и иммунизации. Всемирная организация здравоохранения, 2009 г.] Тематики вакцинология, иммунизация Синонимы РТГА EN hemagglutination inhibition… … Справочник технического переводчика

- (РТГА) метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови больного, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов препаратом, содержащим вирус, в присутствии иммунной к нему сыворотки крови … Большой медицинский словарь

РТГА

РТГ - реакция торможения гемагглютинации … Словарь сокращений русского языка

- (позднелат. infectio заражение) группа болезней, которые вызываются специфическими возбудителями, характеризуются заразительностью, циклическим течением и формированием постинфекционного иммунитета. Термин «инфекционные болезни» был введен… … Медицинская энциклопедия

Эта страница глоссарий. # А … Википедия

Основные сокращения, принятые в Ветеринарном энциклопедическом словаре - a., aa, artena, arteriae aa ana (поровну) АМН СССР Академия медицинских наук СССР АН СССР Академия наук СССР Bac. Bacillus Bact. Bacterium БССР Белорусская ССР в., вв. век, века v., vv. vena, venae ВАСХНИЛ Всесоюзная ордена Ленина и… … Ветеринарный энциклопедический словарь

Аг антиген АЕ антитоксическая или антигенная единица антибактер. антибактериальный Ат антитело АТФ аденозинтрифосфорная кислота бактер. бактериальный бактериол бактериологический бактериоскоп. бактериоскопический БАС бактерицидная активность… … Словарь микробиологии

- (от лат. serum сыворотка и...Логия) буквально учение о свойствах сыворотки крови; обычно под С. понимают раздел иммунологии, изучающий взаимодействие антител (См. Антитела) сыворотки с антигенами (См. Антигены). Серологические реакции… … Большая советская энциклопедия

В основе реакции гемагглютинации лежит феномен склеивания эритроцитов, происходящий под влиянием различных факторов. Различают прямую и непрямую гемагглютинацию.

Методика постановки реакции непрямой гемагглютинации состоит из нескольких этапов. Вначале эритроциты отмывают изотоническим раствором хлорида натрия, затем при необходимости (при использовании антигенов белковой природы) их обрабатывают раствором танина 1: 20000 и сенсибилизируют растворимыми антигенами. После отмывания буферным изотоническим раствором хлорида натрия эритроцитарный антиген готов к употреблению. Исследуемые сыворотки разводят изотоническим раствором хлорида натрия в пробирках или специальных пластмассовых пластинках с луночками, затем к каждому разведению сыворотки добавляют эритроцитарный диагностикум. Результаты реакции непрямой гемагглютинации учитывают по характеру осадка эритроцитов, образовавшегося на дне пробирки. Положительным считают результат реакции, при котором эритроциты равномерно покрывают все дно пробирки. При отрицательной реакции эритроциты в виде маленького диска или «пуговки» располагаются в центре дна пробирки

Основные компоненты РП:

А) растворимый антиген,

Б) Специфические антитела (сыворотка)

(РТГА) - метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови больного, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов препаратом, содержащим вирус, в присутствии иммунной к нему сыворотки крови.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении антигенов вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты.
РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.
Механизм. Типирование вируса проводят в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с набором типоспецифических сывороток. Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы вируса А с антигенами H 0 N 1 , H 1 N 1 , Н 2 N 2 , H 3 N 2 и др. могут быть дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток.

В основе реакции гемагглютинации лежит феномен склеивания эритроцитов, происходящий под влиянием различных факторов. Различают прямую и непрямую гемагглютинацию.
При реакции прямой гемагглютинации происходит склеивание эритроцитов при адсорбции на них определенных антигенов, например вирусов.
В серологических исследованиях применяют реакцию торможения прямой гемагглютинации, когда выделенный у больного вирус нейтрализуют специфической иммунной сывороткой, а затем соединяют с эритроцитами. Отсутствие гемагглютинации говорит о соответствии вируса и используемой иммунной сыворотки.

Реакция непрямой гемагглютинации (пассивная гемагглютинация) наблюдается в тех случаях, когда к эритроцитам, заранее обработанным (сенсибилизированным) различными антигенами, прибавляют иммунную сыворотку или сыворотку больного, имеющую соответствующие антитела. Происходит специфическое Склеивание эритроцитов, их пассивная гемагглютинация.

Реакция непрямой, или пассивной, гемагглютинации по чувствительности и специфичности превосходит другие серологические методы, и ее используют при диагностике инфекций, вызванных бактериями, риккетсиями, простейшими.

Реакция торможения гемагглютинации - серологическая реакция, основанная на способности антител предотвращать агглютинацию эритроцитов гемагглютинирующими видами вирусов (аденовирусами, арбовирусами, некоторыми энтеровирусами, вирусами гриппа и парагриппа, кори, реовирусами). Специфические антивирусные антитела взаимодействуют с поверхностными молекулами гемагглютининов вирионов этих вирусов и блокируют их связывание с комплементарными им молекулами мембраны эритроцитов.

В последнее время реакция широко используется в лабораториях клинической вирусологии для определения титров специфических антител к тем или иным вирусам, а также для серологической идентификации и типирования изолятов вирусов из клинического материала от больных. Используют несколько ограничено в силу наличия в сыворотке крови людей неспецифических ингибиторов вирусов, а также естественных антител - агглютининов.

Реакция нейтрализации - реакция торможения гемагглютинации (РТГА).

РТГА применяется:
-для серотипирования вирусов;
-для серодиагностики инфекций.
Выделяют два способа постановки:
- капельный способ на стекле (ориентировочная реакция), применяется для серо копирования вирусов;
- развернутый в пробирках.

Механизм . У некоторых вирусов (например, гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных, в зависимости от вида вируса. При наличии в сыворотке антител - антигемагглютининов наблюдаются ингибирования активности вирусов.
РТГА.
Цель: серотипирование вируса гриппа А

Компоненты:
1. Исследуемый материал - аллантоисная жидкость куриного эмбриона,
2. Диагностические противогриппозные типоспецифические сыворотки,
3. 5 % взвесь куриных эритроцитов.
4. Физиологический раствор.

Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).

Реакция гемагглютинации (РГА).

Гемагглютинация – это феномен склеивания эритроцитов вследствии воздействия на них различных микроорганизмов.

Механизм гемагглютинации заключается в склеивании эритроцитов(животных или человека), на поверхности которых адсорбировались микроорганизмы; последние являются мостиками, соединяющими соседние эритроциты. Возможно также, что микроорганизмы, адсорбированные на поверхности эритроцитов, меняют их заряд, вследствие чего эритроциты приобретают способность склеиваться, оседая на дно пробирки или лунки планшета тонкой плёнкой в виде перевёрнутого зонтика (картина полной гемагглютинации).

Отношение разных видов микроорганизмов к агглютинации эритроцитов животных того или иного вида (или человека) устанавливают эмпирическим путём. Как правило, микроорганизмы, составляющие одну таксономическую группу, агглютинируют эритроциты одних и тех же видов животных. Видовая принадлежность агглютинируемых эритроцитов нередко используется для индикации микроорганизмов.

Реакция торможения гемагглютинации(РТГА).

Гемагглютинация – обратимый процесс. О специфичности микробной гемагглютинации судят по эффекту торможения или подавления её соответствующими антимикробными антителами. Это явление лежит в основе РТГА. Механизм РТГА заключаеться в том, что противомикробные антигемагглютинины препятствуют микроорганизмам агглютинировать эритроциты чувствительных видов животных.

В зависимости от цели постановки РТГА её результатом являеться либо идентификация изолированного штамма, гемагглютинацию которого подавила известная сыворотка, либо обнаружение специфических противомикробных антител в исследуемой сыворотке крови.

4. Реакция связывания комплемента (РСК) - это сложная реакция, которая протекает в две фазы. Для её постановки необходимы следующие ингредиенты: антиген, антитело, комплемент, эритроциты барана, гемолитическая иммунная сыворотка.

В РСК принимают участие две системы антиген - антитело: специфическая и гемолитическая. Специфическая система представляет собой:

а) известный антиген (диагностикум) и сыворотку крови больного или переболевшего данной инфекцией (содержащую соответствующие этому антигену антитела);

б) или неизвестный антиген и известную диагностическую иммунную сыворотку крови реконвалисцента. Если антиген и антитело гомологичны, они образуют специфический невидимый комплекс, который сорбирует на себе комплемент.

Адсорбция комплемента на специфическом комплексе может быть выявлена лишь с помощью гемолитической системы, которая состоит из антигена (эритроциты барана) и иммунной сыворотки (антисыворотки к нему). Гемолиз эритроцитов в гемолитической системе наступает лишь в присутствии свободного комплемента.

В случае образования специфического комплекса он адсорбирует коплемент. При добавлении гемолитической системы гемолиза эритроцитов не происходит (положительный результат). Если антиген и антитело гетерологичны, комплемент находится в свободном виде, так как отдельно ни антигеном, ни антителом он не сорбируется. При добавлени гемолитической системы происходит гемолиз эритроцитов (отрицательный результат).

РСК, как и все серологические реакции, универсальна. Она может быть использована для выявления вирусных антигенов в заразном материале, а также для обнаружения антител в сыворотке крови больных и переболевших.

5.Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) или непрямой гемагглютинации (РНГА), широко используется в вирусологической практике при диагностике кори, респираторно-синцитиальной вирусной инфекции, заболеваний, вызываемых вирусами группы Коксаки В, клещевого энцефалита, бешенства, гепатита В, аденовирусами и др.

Суть реакции заключается в том, что эритроциты (чаще всего человека или барана), сенсибилизированные антигеном (или антителом) в присутствии гомологичного антитела (или антигена) склеиваются, т.е. дают феномен пассивной гемагглютинации.

Так как все антигены (антитела) хорошо сорбируются на эритроцитах, последние предварительно обрабатывают танином, после чего их способность сорбировать белки резко увеличивается.

Эритроциты, сенсибилизированные антигенами , называют эритроцитарными диагностикумами , эритроциты, сенсибилизированные антителами , называют антительными диагностикумами.

РПГА обладает более высокой чувствительностью, чем реакции связывания комплемента и встречного иммуноэлектрофореза.

Имунохроматографический анализ (ИХА) – это метод определения наличия определённых концентраций веществ в биологическом материале (моча, цельная кровь, сыворотка или плазма крови, слюна, кал и т.д.) и основывается на реакции между антигеном и соответствующим ему антителом. Данный метод анализа осуществляется с помощью индикаторных полосок, палочек, панелей или тест-касет, которые обеспечивают скорость проведения тестирования. ИХА – сравнительно молодой метод анализа, он часто описывается в литературе также как метод сухой иммунохимии, стрип-тест, QuikStrip cassette, QuikStrip dipstick, экспресс-тест или экспресс-анализ. Эти названия связаны со скоростью проведения этого метода анализа.

Принцип действия иммунохроматографического теста заключаеться в том, что при опускании теста в физиологическую жидкость, она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Движущей фазой в данном случае являеться физиологическая жидкость. Вместе с жидкостью двигаются и антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген (гормон, инфекционный или онкологический маркер), осуществляется его связывание, как с первым, так и со вторым типом антител, что уже является иммунологическим методом анализа. При этом осуществляется накопление антител с красителем вокруг антител, жестко иммобилизированных в тест-зоне ИХА-полоски, что проявляется в виде яркой тёмной полосы. Несвязанные антитела с красителем мигрируют дальше вдоль полоски и взаимодействуют с второстепенными антителами в контрольной зоне, где и проявляется вторая тёмная полоса. Взаимодействие (и тёмная полоса) в контрольной зоне выявлятся всегда (если анализ проведен правильно), независимо от присутствия исследуемого антигена в физиологической жидкости. Результаты определяются визуально или компьютерной обработкой отсканированного изображения.

Принцип РИФ основан на определении флюоресцирующих антител. Адсорбированный антиген соеденяют с иммунной сывороткой, после чего, образуемый комплекс антиген-антитело обрабатывают γ-глобулином, соединённым с флюорисцин - изотиоцианатом. Так как меченые флюорохромом антитела не теряют способности соединяться с антигеном и тем самым обуславливают свечение препаратов в сине - фиолетовых лучах, источником которых является ртутно-кварцевая лампа. Этот метод даёт возможность поставить диагноз уже через 2-48 часов от начала заболевания. Материалами для проведения исследования могут быть смывы с носоглотки, кровь, спинномозговая жидкость и другие биологические жидкости, где может находиться возбудитель.

Реакция латекс агглютинации является одним из видов реакции агглютинации, в которой в качестве носителя антигена или антитела используют синтетические полимерные частички-латексы. Эта реакция используется с целью выявления наличия антител в сыроватке крови обследуемых людей, идентификации возбудителя заболевания. Растворимые мелкодисперсные антигены бактериальной клетки белковой или полисахаридной природы адсорбируют на поверхности монодисперсного латекса. Такие латексные частички с бактериальными антигенами под действием имvунной сыворотки склеиватся, что приводит к образованию характерного осадка - тонкой плёночки с неровными краями. Реакцию оценивают визуально («+» по осадку плёнки на дне лунки).

Иммуноблотинг – качественный метод, который позволяет с высокой достоверностью определять Аg или Аt в любой биологической среде организма. Специфичность и чувствительность метода - 99-100 %. Метод иммуноблотинга похожий на ИФА, однако финальный этап исследования заключается в переносе и иммобилизации биополимера (Аg или Аt) на пористую мембрану, где биополимер анализируют с помощью иммуносорбентов. Иммуноблотинг благодаря своей специфичности относится к референс-тестам (подтверждающим).

Иммуноферментный анализ (ИФА) или, точнее, ферментный иммуносорбентный анализ (англ. enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA) - иммунологический метод для обнаружения определенных антигенов, основанный на идентификации комплексов антиген-антитело. Широко используется в лабораторной диагностике.

Существует целый ряд подходов, которые позволяют определить, состоялось ли связывание антитела с антигеном-мишенью. Один из них - это ферментный иммуносорбентный анализ (ELISA), который часто используется для диагностики разнообразных антигенов. Процедура анализа включает такие этапы:

Основной принцип ELISA - специфическое связывание первого антитела с мишенью. Если молекула-мишень представляет собой белок, то его очищенный препарат обычно используют для получения антител, с помощью которых потом и выявляют данную мишень. Раньше использовались первые антитела, которые были по своей природе поликлональными. Разработка и применение моноклональных антител дало возможность значительно улучшить специфичность иммуноферментного анализа.

Ферментный иммуносорбентный анализ широко применяется для диагностики разнообразных инфекционных заболеваний, онкопроцессов (в основном благодаря специфическим белкам и пептидам), определения разнообразных низкомолекулярных соединений, таких как токсины, лекарственные средства и т.п.